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liuwhlong

铁虫 (初入文坛)

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5楼: Originally posted by BioChen at 2014-05-01 20:43:14
全突变是什么意思?是根本不是你想要的基因,还是突变率很高?
如果不是你要想要的基因,
cDNA的PCR产物后直接送去测序,如果是你想要的基因,继续往下做。如果不是你想要的基因,请分析PCR产物序列,找出错配的原 ...

多谢,试了你的方法,效果明显,重新用LA高保真酶扩了一次,这次全扩出来了,测序结果也正确,十分感谢提供宝贵的建议!
11楼2014-05-21 22:38:30
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liuwhlong

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
9楼: Originally posted by lim1896 at 2014-05-04 10:48:05
首先确定是出现两个问题,一个是P不出来,全是二聚体;在一个就是测序发现不是目的片段
问题回答1:出现引物二聚体的原因有很多,有可能是引物浓度太高,一般用0.5um的浓度就够了(50ul体系里加1ul 10um浓度的引物 ...

不好意思是我表述的不清楚,是送去测序的时候,目的基因序列有碱基缺失,还有点突变,换了LA酶,重提RNA后,问题解决了,谢谢指点,不胜感激
12楼2014-05-21 22:47:55
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