24小时热门版块排行榜

返回列表

黄蔷薇

铜虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 552
散金: 7
帖子: 16
在线: 27.7小时
虫号: 1997311
注册: 2012-09-13
性别: MM
专业: 食品科学基础

[求助] 有关蓝莓果实DNA的提取问题

我选择的是CTAB法提取的蓝莓果实的DNA，但是提了好几次还是没有提取成功，不知道哪边出错了。

我使用的试剂是：2%CTAB缓冲液
配方是： CTAB：5g NACl20.454g 1M Tris-HCl 25mL， 0.5M EDTA 10mL，总体积定容到25mL。
提取步骤是：
1、液氮研磨蓝莓果实成粉末，取0.5g粉末到含有700μL 已经预热30min的2%CTAB缓冲液中，缓冲液中已经加入4%β-巯基乙醇；
2、充分混匀粉末与裂解液，65℃水浴30min；
3、凉至室温之后加入300μL的预冷过的3mol/L醋酸钠，轻轻晃动管内物质，冰浴30min；
4、12000r/min离心5min，提取上清液转移至干净的试管中，加入与上清液等体积的氯仿：异戊醇（24:1），上下晃动管内物质；
5、12000r/min 离心8min提取上清液加入2μLRNase（10mg/mL），轻缓摇匀后在37℃消化10min，随后加入等体积的氯仿：异戊醇，上下晃匀管内物质；
6、12000r/min离心8min ,提取上清液，加入2倍体积无水乙醇和1/10体积3mol/L醋酸钠，充分混匀管内物质放在-20℃20min；
7、12000r/min离心8min，弃上清，加入1mL70%乙醇洗涤2次，12000r/min离心5min；
8、弃上清液，在干净的工作台上晾干沉淀，最后加入50μL灭菌去离子水溶解，轻缓混匀，放在-20℃中储存备用。

将上述提取的DNA做了凝胶电泳，用0.8%琼脂糖凝胶电泳，120V 跑胶40min，Marker使用的是Hind DNAIII，所得的电泳图是：

请问提过果实DNA的大神们，这是哪里出现问题了，怎么就没有条带出现呢？
请大家给予帮助，在此特别感谢！

Administrator 2014-04-25 14 小时 14 分钟.jpg

回复此楼