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qfish311

铁虫 (初入文坛)

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[交流] western blot求助

前段时间做western，转的还不错，因为marker很清楚。但是就是染色的时候，我们用的AEC的染色体系，可是我每次配完的染色液都是淡黄色，有时在4度放一夜会变成浅红色，可是有很多絮状沉淀，染色效果也很不好，背景很暗，各位大虾能帮我解决解决吗？谢谢啦

[search]western blot[/search]

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1楼 2008-03-07 21:23:13

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biocore

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reasonspare(金币+3,VIP+0):xiexie 欢迎常来,.兄弟很热心.

引用回帖:

Originally posted by qfish311 at 2008-3-7 21:23:
前段时间做western，转的还不错，因为marker很清楚。但是就是染色的时候，我们用的AEC的染色体系，可是我每次配完的染色液都是淡黄色，有时在4度放一夜会变成浅红色，可是有很多絮状沉淀，染色效果也很不好，背景 ...

呵呵，被氧化了。
这个东西，很容易被氧化。
25mg溶于2.5mlDMF以后，然后加入47.5ml的醋酸buffer，ph5.0.
最重要的是要避光，保存在黑暗里，然后要盖子一定要盖紧。
然后在使用前，才加入双氧水。
絮状，就是从溶于中析出了。
这个，一般是用之前，现配现用。效果比较好。
不过这个东西，不能保存太久。

[ Last edited by biocore on 2008-3-7 at 23:07 ]