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liuyil

银虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by hhl1230 at 2014-04-24 13:16:01
我喊师姐看的时候她也这么说,但因为是新手,不敢这么霸气,所以要是再跑几次还这样,就直接切了。。。...

我之前也是这样的,有时候可能是,片段都是400多,但是跑出来总有点差距,但是送去测序是没有问题的,可能是你的胶布均匀,所以和M相比才不对,正常的,别浪费时间了,送去测序,也不贵。
未来不知道会怎么样,做好当下最重要。
11楼2014-04-25 10:42:46
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xygcdmr

木虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by hhl1230 at 2014-04-24 20:15:07
嗯。但是50min会不会太长了,我跑的这个是用的1%的,120V,不到10min就跑成这样了。。...

用2%的胶,120V的话就跑30min
12楼2014-04-25 17:38:59
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Hliotrope

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

循环次数有点多吧,还有变性时间,不知道你是DNA做模板还是菌落PCR,DNA做模板变性时间也有点长了。循环次数太多了会产生非特性序列。
Someone
13楼2014-04-27 15:05:49
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hhl1230

新虫 (小有名气)

引用回帖:
11楼: Originally posted by liuyil at 2014-04-25 10:42:46
我之前也是这样的,有时候可能是,片段都是400多,但是跑出来总有点差距,但是送去测序是没有问题的,可能是你的胶布均匀,所以和M相比才不对,正常的,别浪费时间了,送去测序,也不贵。...

超级忧桑,第二次同样的条件就跑不出来了。。
14楼2014-04-27 19:46:56
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hhl1230

新虫 (小有名气)

引用回帖:
13楼: Originally posted by Hliotrope at 2014-04-27 15:05:49
循环次数有点多吧,还有变性时间,不知道你是DNA做模板还是菌落PCR,DNA做模板变性时间也有点长了。循环次数太多了会产生非特性序列。

cDNA做的模板,之前也是跑的34个循环,是感觉杂带多。
15楼2014-04-27 19:48:15
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Hliotrope

木虫 (著名写手)

引用回帖:
15楼: Originally posted by hhl1230 at 2014-04-27 19:48:15
cDNA做的模板,之前也是跑的34个循环,是感觉杂带多。...

PCR方面不太懂,减少循环次数看看,25到30次,然后或者也和上面说的,送去测序看看吧,琼脂糖凝胶就是一个大概的检测DNA介质,不能精确,所以有时候会有差别。。。
Someone
16楼2014-04-27 19:57:29
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