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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 我的条带小于目的条带。。。求助。。。。
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hhl1230

新虫 (小有名气)

[求助] 我的条带小于目的条带。。。求助。。。。 已有5人参与

我的目的条带在500多一点，但是跑出来是小于500的，问过师兄师姐，好像不是引物二聚体。求各位前辈指教。PCR条件：
预变性：95℃，5min，
变性:95℃，30s，
退火：60.5℃，30s，
延伸：72℃，30s,
循环：34
再延伸：72℃，10min,
12℃forever
体积：10μl--------上游引物：0.4；
                            下游引物：0.4
                             模板：1
                              水：3.2
                              MIX：5
图中:12345为同样的引物，1,23,45分别为不同的模板

我的条带小于目的条带。。。求助。。。。
2.jpg
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1楼 2014-04-23 19:38:26
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Hliotrope

木虫 (著名写手)
引用回帖:
15楼: Originally posted by hhl1230 at 2014-04-27 19:48:15
cDNA做的模板，之前也是跑的34个循环，是感觉杂带多。...

PCR方面不太懂，减少循环次数看看，25到30次，然后或者也和上面说的，送去测序看看吧，琼脂糖凝胶就是一个大概的检测DNA介质，不能精确，所以有时候会有差别。。。
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Someone
16楼2014-04-27 19:57:29
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世外清风

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-04-23 23:42:48
1、可适当提高退火温度增加特异性，2、胶跑的太烂，完全分不清楚，3、可以回收片段测序确认
赞一下 回复此楼
2楼2014-04-23 22:05:56
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xygcdmr

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-04-23 23:42:54
退火温度可以再高一点，延伸40秒，胶可以用2%的，跑的时间长一些，50分钟左右。
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3楼2014-04-23 22:53:52
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jonew

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
割胶测序不就行了
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借口很贱，，，
4楼2014-04-23 23:39:19
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