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新虫 (著名写手)

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[求助] 罗丹明123染色检测膜电位，已有1人参与

我是在12孔板里铺板的，然后药物处理完了，现在问题是接下来具体怎么操作？
我们这里有荧光显微镜，说明书里写的是黄绿色光，那滤光片选择啥颜色的比较好呢？绿的？紫的？黄的？还是啥？我直接PBS洗了以后，加了罗丹明123稀释液，37摄氏度避光30min，然后在六孔板里直接观察，但是不知道是自己调的还是怎么回事就是调节不出来好的图像。然后尝试了，用细胞刮把细胞刮下来，然后滴到了载玻片上，观察也是效果不好。。。然后加了点多聚甲醛固定一下，15min吧，然后洗一下，然后观察，感觉细胞很少很少，没有几个细胞，可能洗都洗没了。。。
我看文献有的是胰蛋白酶消化处理以后，PBS洗，之后染色，然后直接检测流式
也有的是96孔板里铺板，然后96孔板洗后，96孔板里染色，洗，然后直接荧光分光光度计测，问题是我们这只有酶标仪，酶标仪可以用？如果可以的话那波长怎么设置，酶标仪只有一个设置波长，不知道是激发还是发射波长，但是罗丹明的介绍里有一个是激发一个是发射，如果用酶标仪测的话，应该怎么设置波长呢？？？？？还是酶标仪没有办法测，，还有普通的分光光度计可以测？如果测也是这个问题，怎么设置波长？？
现在的问题是已经铺好了在12孔板里，已经药物处理好了，然后怎么办？？？？？？？？
可以固定一下?固定怎么搞?我尝试的固定了一下，固定完了总是要洗的，洗其实我就是加了PBS在六孔板然后就吸出来，结果细胞很少，是不是应该离心一下？
先染色再固定还是先固定再染色呢？？？具体怎么搞？

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