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新虫 (著名写手)

[求助] 罗丹明123染色检测膜电位, 已有1人参与

我是在12孔板里铺板的,然后药物处理完了,现在问题是接下来具体怎么操作?
我们这里有荧光显微镜,说明书里写的是黄绿色光,那滤光片选择啥颜色的比较好呢?绿的?紫的?黄的?还是啥?我直接PBS洗了以后,加了罗丹明123稀释液,37摄氏度避光30min,然后在六孔板里直接观察,但是不知道是自己调的还是怎么回事就是调节不出来好的图像。然后尝试了,用细胞刮把细胞刮下来,然后滴到了载玻片上,观察也是效果不好。。。然后加了点多聚甲醛固定一下,15min吧,然后洗一下,然后观察,感觉细胞很少很少,没有几个细胞,可能洗都洗没了。。。
我看文献有的是胰蛋白酶消化处理以后,PBS洗,之后染色,然后直接检测流式
也有的是96孔板里铺板,然后96孔板洗后,96孔板里染色,洗,然后直接荧光分光光度计测,问题是我们这只有酶标仪,酶标仪可以用?如果可以的话那波长怎么设置,酶标仪只有一个设置波长,不知道是激发还是发射波长,但是罗丹明的介绍里有一个是激发一个是发射,如果用酶标仪测的话,应该怎么设置波长呢?????还是酶标仪没有办法测,,还有普通的分光光度计可以测?如果测也是这个问题,怎么设置波长??
现在的问题是已经铺好了在12孔板里,已经药物处理好了,然后怎么办????????
可以固定一下?固定怎么搞?我尝试的固定了一下,固定完了总是要洗的,洗其实我就是加了PBS在六孔板然后就吸出来,结果细胞很少,是不是应该离心一下?
先染色再固定还是先固定再染色呢???具体怎么搞?
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清茶7777777

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

你好,我现在有和你一样的问题,我们也是只有酶标仪,不知道你的问题解决了没,万分感谢
2楼2015-05-06 15:52:01
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