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求助：关于细胞染色
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我是学化学的，现在的课题主要内容都是养细胞，关于这个细胞染色方面的问题我实在不明白！ 一生科院的师兄帮我选择了DAPI、PI、罗丹明这三种染料，罗丹明又分罗丹明B和罗丹明123，我买的是前者，拿到的试剂是一大瓶，100g的样子，感觉不太像生化试剂。试着染了一次，结果罗丹明B的浓度可能配高了，显微镜下看到的都是红的，都分不清楚细胞了。 我现在要重新开始试验染料的浓度和染色时间以及清洗次数，不知道哪位达人可以告知怎么样可以查到关于细胞染色染料浓度的文献？还有就是到底罗丹明是哪种可用于细胞染色，我只需要看到细胞的形态和生长状况，不看其亚显微结构！谢谢了！ |
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两种罗丹明都可以用于细胞染色，但是用途不一样。 罗丹明B的染色protocol如下： 1. 将50 µg 罗丹明B溶解到78 µl DMSO中制备成1 mM 罗丹明B-DMSO溶液。 2. 用载玻片准备细胞。细胞数目应为5×104-5×105个/ml。 3. 孵育该载玻片，用PBS或Hank's液洗涤细胞。 4. 用培养基稀释1 mM 罗丹明B溶液以制备20-200 nM 罗丹明B缓冲液。 5. 将罗丹明B缓冲液a) 加入载玻片并在37℃下孵育30分钟至1小时。 6. 去除罗丹明B缓冲液并用培养基洗涤细胞。b) 7. 用带有罗丹明滤光片的荧光显微镜观察细胞。 a) 加入细胞前将罗丹明B缓冲液放在37℃下孵育。 b) 洗涤细胞后为了固定，加入10％福尔马林缓冲液并孵育15-20分钟，接着用PBS洗涤。 |
2楼2008-03-07 20:54:43
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