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我们一起

铜虫 (小有名气)

[求助] 基因测序

问一下,基因测序的时候使用的是多个细胞的混合物?扩增的是DNA双链还是单链?一般扩增多少倍?你们测得片段的序列后进行拼接吗?
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lueny

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
我们一起: 金币+10, 博学EPI+1, ★★★很有帮助 2014-04-20 11:27:22
扩增的DNA肯定是双链了

一般扩增25-35个循环吧,具体倍数没算过,估计是几十万倍以上。

sanger测序一般每个反应能测出500-800bp,看你的片段长度了,如果超过这个范围,可能需要测好几个反应,然后拼成全序列。另外sanger测序都是前500bp准确性比较高,后面的准确性会稍微降低点。假如你有个1200bp的产物,可以从两头各测800bp,然后靠中间重复的400bp来将序列拼完整,这样得到的序列非常准确。

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2楼2014-04-20 08:08:42
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我们一起

铜虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by lueny at 2014-04-20 08:08:42
扩增的DNA肯定是双链了

一般扩增25-35个循环吧,具体倍数没算过,估计是几十万倍以上。

sanger测序一般每个反应能测出500-800bp,看你的片段长度了,如果超过这个范围,可能需要测好几个反应,然后拼成全序列 ...

感谢
3楼2014-04-20 11:27:16
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