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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 我酶切连接总是连不上去，连了很长时间的，恳请高手过来帮帮我
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sometimess

新虫 (初入文坛)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-06-12 18:52:15
从图中看，片段和载体都没有问题，我们实验室，一直都是把载体和片段按质量调为1:1，宝生物的连接酶，10ul体系，宝生物的感受态，做完转化，长出20个左右菌斑，一般都能连上，再试试、
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21楼2014-06-12 14:35:17
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王宝明WANG

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by allegory at 2014-04-19 21:16:43
那么麻烦，直接用重组链接一步到位，引物设计时加上重组位点。不过试剂盒的确贵了点。
用传统方法的话，按道理来说500和11K的还是很好连接的，你10微升的体系片段和载体分别几微升？可以适当调整比例，然后丢4°C一 ...

你好  我现在也有这个问题  
我的外源片段是8000bp（CLA1，PAC1双切）想与腺病毒骨架（28000bp)连接，小弟目前已经连接一年之久，但就是连接不上，每次转化长的斑很少，最多时也不超过30个。麻烦大神们帮帮，谢谢了。
目前我想到的方法有：1、换了商用化的DH5感受态 2、换了不同的腺病毒载体 3、换了不同的连接酶 4、摸过不同的连接比例
我认为可能有点问题：1、我的酶切产物都是一直放在四度 ，有可能有部分降解。
  请问你的重组链接是怎么回事
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22楼2014-07-09 15:34:06
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allegory

禁虫 (著名写手)
本帖内容被屏蔽
23楼2014-07-09 16:35:26
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