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sometimess

新虫 (初入文坛)


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-06-12 18:52:15
从图中看,片段和载体都没有问题,我们实验室,一直都是把载体和片段按质量调为1:1,宝生物的连接酶,10ul体系,宝生物的感受态,做完转化,长出20个左右菌斑,一般都能连上,再试试、
21楼2014-06-12 14:35:17
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王宝明WANG

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
10楼: Originally posted by allegory at 2014-04-19 21:16:43
那么麻烦,直接用重组链接一步到位,引物设计时加上重组位点。不过试剂盒的确贵了点。
用传统方法的话,按道理来说500和11K的还是很好连接的,你10微升的体系片段和载体分别几微升?可以适当调整比例,然后丢4°C一 ...

你好  我现在也有这个问题  
我的外源片段是8000bp(CLA1,PAC1双切)想与腺病毒骨架(28000bp)连接,小弟目前已经连接一年之久,但就是连接不上,每次转化长的斑很少,最多时也不超过30个。麻烦大神们帮帮,谢谢了。
目前我想到的方法有:1、换了商用化的DH5感受态 2、换了不同的腺病毒载体 3、换了不同的连接酶 4、摸过不同的连接比例
我认为可能有点问题:1、我的酶切产物都是一直放在四度 ,有可能有部分降解。
  请问你的重组链接是怎么回事
22楼2014-07-09 15:34:06
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allegory

禁虫 (著名写手)

本帖内容被屏蔽

23楼2014-07-09 16:35:26
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