我酶切连接总是连不上去，连了很长时间的，恳请高手过来帮帮我 - 分子生物 - PCR相关

11楼2014-04-19 22:10:46

yxliu

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TA还是T4

12楼2014-04-20 21:37:35

蓝索道人

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单酶切可以尝试用乙醇沉淀，还有可以去磷酸，尝试一下吧

努力就有收获！

13楼2014-04-21 09:07:17

永远不知道

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引用回帖:

9楼: Originally posted by yushijiang30 at 2014-04-19 17:34:29
你好，怎么回收的能到50的，我今天酶切了3管目的基因，50微升体系的，然后都加到一个过滤柱里，结果测出来的浓度才10几纳克每微升？...

呵呵，这要看你的目的片段是多大的了，一般小于700的片段回收率较低，对于小片段，只能多做几关，起码要5管

14楼2014-04-21 11:16:14

永远不知道

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引用回帖:

8楼: Originally posted by 随风飘摇11 at 2014-04-19 17:22:10
比例是不是说的摩尔比？和体积比怎么换算过来？最近也一直在构建载体
...

纳克每微升

15楼2014-04-21 11:16:55

r-rainbow

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不长菌可能是载体浓度不够加40~50ng左右

16楼2014-04-21 16:18:05

lairongpeng

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引用回帖:

3楼: Originally posted by yushijiang30 at 2014-04-18 15:43:20
感受态是刚买的，应该没问题，你看看我的目的片段跑胶是不是有点暗啊，35纳克/微升少不少？...

回收后35已经很高了，我做的3ng/ul都可以。你可以调节一下插入片段和载体的比例（我一般用1:4或者1:6）请你谷歌“ligation calculator” 然后按照它的计算来加样

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17楼2014-04-22 13:30:19

eileen8519

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可能是插入片段和载体比例不对，调整一下试试，我以前也遇到过。

18楼2014-04-22 15:51:33

邱玉信

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19楼2014-06-12 11:06:56

duowan17

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我也觉得是你载体浓度的问题，不过11000bp说实话一点都不大。你可以大提质粒一次，然后酶切回收得到足够量的回收片段，应该是很好连的。

20楼2014-06-12 14:10:16