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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 我酶切连接总是连不上去，连了很长时间的，恳请高手过来帮帮我
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Mornchen

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
增大目的条带的量 减少载体 胶回收后不要用EB洗脱 尝试用水洗脱
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11楼2014-04-19 22:10:46
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yxliu

金虫 (小有名气)
TA还是T4
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12楼2014-04-20 21:37:35
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蓝索道人

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
单酶切可以尝试用乙醇沉淀，还有可以去磷酸，尝试一下吧
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努力就有收获！
13楼2014-04-21 09:07:17
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永远不知道

至尊木虫 (著名写手)

金花家族创始人
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
9楼: Originally posted by yushijiang30 at 2014-04-19 17:34:29
你好，怎么回收的能到50的，我今天酶切了3管目的基因，50微升体系的，然后都加到一个过滤柱里，结果测出来的浓度才10几纳克每微升？...

呵呵，这要看你的目的片段是多大的了，一般小于700的片段回收率较低，对于小片段，只能多做几关，起码要5管
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14楼2014-04-21 11:16:14
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永远不知道

至尊木虫 (著名写手)

金花家族创始人
引用回帖:
8楼: Originally posted by 随风飘摇11 at 2014-04-19 17:22:10
比例是不是说的摩尔比？和体积比怎么换算过来？最近也一直在构建载体
...

纳克每微升
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15楼2014-04-21 11:16:55
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r-rainbow

铁虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
不长菌可能是载体浓度不够 加40~50ng左右
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16楼2014-04-21 16:18:05
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lairongpeng

银虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-06-12 18:49:28
引用回帖:
3楼: Originally posted by yushijiang30 at 2014-04-18 15:43:20
感受态是刚买的，应该没问题，你看看我的目的片段跑胶是不是有点暗啊，35纳克/微升少不少？...

回收后35已经很高了，我做的3ng/ul都可以。你可以调节一下插入片段和载体的比例（我一般用1:4或者1:6）请你谷歌“ligation calculator” 然后按照它的计算来加样

[ 发自小木虫客户端 ]
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17楼2014-04-22 13:30:19
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eileen8519

金虫 (小有名气)
可能是插入片段和载体比例不对，调整一下试试，我以前也遇到过。
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18楼2014-04-22 15:51:33
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邱玉信

禁虫 (小有名气)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流经验！ 2014-07-16 15:31:11
本帖内容被屏蔽
19楼2014-06-12 11:06:56
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duowan17

金虫 (正式写手)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-07-16 15:31:53
我也觉得是你载体浓度的问题，不过11000bp说实话一点都不大。你可以大提质粒一次，然后酶切回收得到足够量的回收片段，应该是很好连的。
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20楼2014-06-12 14:10:16
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