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关于NEB和TAKARA的T4多聚核苷酸磷酸化效率问题,困扰许久了,谢谢
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liuyil
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引用回帖:
10楼
:
Originally posted by
biostar2009
at 2014-04-22 02:21:42
这么久了你还没有做上?
什么事情都有个效率问题,不然我们讨论半天都是废话,annealing确实在水中就可以进行,但是绝对不是annealing的最佳条件。...
磷酸化已经做了几天了,不过没法检测是否磷酸化,也没有检测退火是否成功,只有做了连接才能看到,现在正在准备做连接,十多个小片段的连接,用的是invitrogen 的T4连接酶,5U/ul。
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未来不知道会怎么样,做好当下最重要。
11楼
2014-04-23 12:54:03
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2楼
:
Originally posted by
biostar2009
at 2014-04-18 09:35:26
你注意到了一个现象,但是没有把问题搞清楚。
第一个问题是T4PNK的单位定义,也就是这个酶,1U能干啥。T4PNK的能力是很强的,不管什么公司,1U T4PNK的催化能力都是在nmol级别的,所有多少pmol的产物,不在话下。
...
您好,Ci/mol和TBq/mmol这种单位是什么意思?是怎么换算的?这个反应的话能用二钠盐形式的ATP吗?期待大神的回复,谢谢
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12楼
2014-11-10 14:47:55
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