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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 细胞破碎 细菌
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徐国栋

新虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by hbtmsw at 2014-04-28 13:25:49
buffer 是磷酸缓冲液，破碎率我没关注过，估计是完全破碎了，离心后基本看不到菌体，只有及少量蛋白之类的透明沉淀。菌体量的话我们用的10mL OD值大于2.0的菌液用2mL氢氧化钠能完全破碎，你如果要精细对应的话得自 ...

pH为什么最后要调整至8.0？？
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自我选择，自我努力，自我突破
11楼2014-04-28 16:32:04
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徐国栋

新虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by hbtmsw at 2014-04-28 13:25:49
buffer 是磷酸缓冲液，破碎率我没关注过，估计是完全破碎了，离心后基本看不到菌体，只有及少量蛋白之类的透明沉淀。菌体量的话我们用的10mL OD值大于2.0的菌液用2mL氢氧化钠能完全破碎，你如果要精细对应的话得自 ...

pH最后调整到8.0是方法体系要求还是蛋氨酸的原因
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自我选择，自我努力，自我突破
12楼2014-04-28 16:33:08
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徐国栋

新虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by hbtmsw at 2014-04-28 13:25:49
buffer 是磷酸缓冲液，破碎率我没关注过，估计是完全破碎了，离心后基本看不到菌体，只有及少量蛋白之类的透明沉淀。菌体量的话我们用的10mL OD值大于2.0的菌液用2mL氢氧化钠能完全破碎，你如果要精细对应的话得自 ...

OD没有经过稀释吗
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自我选择，自我努力，自我突破
13楼2014-04-28 16:46:15
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徐国栋

新虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 小章要考研 at 2014-04-28 12:21:56
溶菌酶处理，纤维素酶。。。

酶法破碎是有优点，但是后期蛋白不会影响我测样吗
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自我选择，自我努力，自我突破
14楼2014-04-29 08:40:26
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hbtmsw

木虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 徐国栋 at 2014-04-28 16:31:01
求相关文献  谢谢...

悲催，无文献，我们博士给我的方案
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15楼2014-04-29 09:05:36
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小章要考研

新虫 (小有名气)
引用回帖:
14楼: Originally posted by 徐国栋 at 2014-04-29 08:40:26
酶法破碎是有优点，但是后期蛋白不会影响我测样吗...

再想办法除酶，其他的我就不知道了。。。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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16楼2014-04-29 09:11:28
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小章要考研

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
14楼: Originally posted by 徐国栋 at 2014-04-29 08:40:26
酶法破碎是有优点，但是后期蛋白不会影响我测样吗...

好像可以用固定化酶，然后再除去。。。另外buffer在分子克隆模块有，可以研究一下！

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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17楼2014-04-29 20:22:12
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laozuzunzhe

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

冰浴条件下超声破碎就可以啊
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18楼2014-04-30 09:21:53
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