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银虫 (小有名气)

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引用回帖:

10楼: Originally posted by 呀薯条 at 2014-04-15 09:41:33
那两次板上长得挺多的呢，一次菌落比较小，一次是菌落挺大的。
我的引物设计就用的当初目的基因扩增的引物，两头都有个酶切位点...

那就是失败了重新连接转化，多问问旁边的同胞

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人生就像一直虫子，爬呀爬呀

11楼2014-04-15 15:10:23

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不爱做实验

银虫 (正式写手)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
呀薯条: 金币+3, ★★★很有帮助 2014-04-16 08:41:14

个人觉得可能出现的问题：
1.未连接上或者效率不高
2.氨苄的含量是否合适
3.感受态的问题
4.PCR条带200bp，是否引物不合适，或者退延伸、退火温度不合适
另外，平板放了4、5天应该可以用的，当然，最好别带有太多卫星菌落
最后，保证实验过程别污染。
感受态你可以自己鉴定一下是否好用：
1.用已知抗性且测序的质粒转一下，看长菌情况，当然是长出来长的好才行啊
2.将感受态直接分别涂布于氨苄和卡纳抗性的平板，不长菌才是对的
不过很多情况，就只用第一条验证。

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12楼2014-04-15 18:54:57

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