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银虫 (小有名气)

引用回帖:
10楼: Originally posted by 呀薯条 at 2014-04-15 09:41:33
那两次板上长得挺多的呢,一次菌落比较小,一次是菌落挺大的。
我的引物设计就用的当初目的基因扩增的引物,两头都有个酶切位点...

那就是失败了  重新连接转化,多问问旁边的同胞
人生就像一直虫子,爬呀爬呀
11楼2014-04-15 15:10:23
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不爱做实验

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
呀薯条: 金币+3, ★★★很有帮助 2014-04-16 08:41:14
个人觉得可能出现的问题:
1.未连接上或者效率不高
2.氨苄的含量是否合适
3.感受态的问题
4.PCR条带200bp,是否引物不合适,或者退延伸、退火温度不合适
另外,平板放了4、5天应该可以用的,当然,最好别带有太多卫星菌落
最后,保证实验过程别污染。
感受态你可以自己鉴定一下是否好用:
1.用已知抗性且测序的质粒转一下,看长菌情况,当然是长出来长的好才行啊
2.将感受态直接分别涂布于氨苄和卡纳抗性的平板,不长菌才是对的
不过很多情况,就只用第一条验证。
12楼2014-04-15 18:54:57
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