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mashuyan13

新虫 (小有名气)

引用回帖:
10楼: Originally posted by 国产粗人 at 2014-04-12 18:58:20
观察微观和宏观形态,对比一下菌种鉴定手册,实在不行就dna测序

看过菌种鉴定手册觉得没大用,我的是混合菌,一直分离不出单菌落,卡这了,嘿嘿你做过厌氧菌吗
11楼2014-04-14 13:27:47
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mashuyan13

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 趁年轻到远方 at 2014-04-12 10:30:24
先形态观察,再生理生化实验,确定大方向,最后分子鉴定,dna测序。

好的,谢谢,但是我的是混合菌种,一直分离不出单菌落
12楼2014-04-14 13:32:59
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mashuyan13

新虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by dllchina at 2014-04-12 16:33:22
郁闷~大家说的都很乱
第一步:提总DNA,扩16S,NCBI blast,相似度比较低的话可以考虑是潜在新种,然后需要根据16S 全长调取相关序列,构建分子系统进化树,确定要一起做实验的标准菌株,等菌株到了,才能开始下一 ...

科研需要,懂答题步骤了,就是做不出单菌落
13楼2014-04-14 13:35:03
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mashuyan13

新虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by lbz1219 at 2014-04-12 14:01:32
初步确定一般是形态学观察。但是如果你要确切的结果,最好去专业鉴定机构,这样有说服力。

菌种鉴定不是自己就可以做吗,专业机构给不给分离混合菌呀嘿嘿
14楼2014-04-14 13:51:57
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mashuyan13

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 趁年轻到远方 at 2014-04-12 10:30:24
先形态观察,再生理生化实验,确定大方向,最后分子鉴定,dna测序。

16SrRNA鉴定,扩增出的产物是不是DNA呀,嘿嘿测序的话需要通测吗
15楼2014-04-14 13:55:17
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见神一笑

木虫 (著名写手)

楼主还是看文献吧,虽然菌种鉴定的内容差不多都是那些,但不同的菌还是有些差异的。你自己做哪类菌就上IJSEM上看和的文献。
好好努力
16楼2014-04-14 14:37:20
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趁年轻到远方

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
12楼: Originally posted by mashuyan13 at 2014-04-14 13:32:59
好的,谢谢,但是我的是混合菌种,一直分离不出单菌落...

稀释涂布,多做几次。慢慢就纯化了。
17楼2014-04-14 16:20:41
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趁年轻到远方

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
15楼: Originally posted by mashuyan13 at 2014-04-14 13:55:17
16SrRNA鉴定,扩增出的产物是不是DNA呀,嘿嘿测序的话需要通测吗...

是dna,测序只是测这一个序列的。电泳有明确条带时,再用mark,把你需要的给挖出来,再PCR一下,交由专门的公司测序。
18楼2014-04-14 16:28:01
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doris.gao

新虫 (初入文坛)

菌种鉴定一般就只要提取基因组DNA,然后PCR扩增16s rDNA片段,上GeneBank或者Eztaxon对比即可。一般序列相似度在97%以上就可以认为是同种细菌(当然也有例外,DNA序列仅仅是一个参考指标)
19楼2014-04-15 16:47:21
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lbz1219

金虫 (正式写手)

引用回帖:
14楼: Originally posted by mashuyan13 at 2014-04-14 13:51:57
菌种鉴定不是自己就可以做吗,专业机构给不给分离混合菌呀嘿嘿...

当然可以自己做。摸索,引物,测序不是短时间可以做完的。混合菌的话,你自己做稀释-涂布-划线,一般就可以分离菌种了(我没有问过)。但是如果你要发论文的话,建议去专业机构。
20楼2014-04-15 21:07:48
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