| 查看: 1391 | 回复: 2 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
大肠杆菌 钙离子诱导转化 Amp筛选 重组质粒 已有1人参与
|
||
| 我们这段时间一直在做大肠杆菌BL21的转化，采用的质粒是以PET32a质粒。前段时间转化成功了，留种后复苏在Amp液体培养基上不生长。此后按照前面转化成功的条件却转化不进去了。 |
回复此楼» 猜你喜欢
291求调剂
已经有7人回复
-
300求调剂
已经有8人回复
-
求调剂推荐
已经有7人回复
-
289 分105500药学专硕求调剂(找B区学校)
已经有4人回复
-
0854求调剂
已经有13人回复
-
初试324 中药学 一志愿天中医 求调剂
已经有3人回复
-
药学求调剂
已经有14人回复
-
327求调剂
已经有27人回复
-
急需调剂
已经有5人回复
-
271求调剂
已经有33人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- （侯氏出品）双酶切连接反应之全攻略
已经有89人回复
3楼2014-04-10 10:41:37
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zhang8826857: 金币+5, 鼓励。 2014-04-10 17:14:18
感谢参与，应助指数 +1
zhang8826857: 金币+5, 鼓励。 2014-04-10 17:14:18
|
楼主提到的现象可能有几个方面的问题： 1、质粒。 这个大肠杆菌BL21的转化我们一般都是直接转已经做好的质粒。如果质粒是需要两个片段连接的，我们一般会现在EcoliDH5a中做好，然后提质粒转BL21。 2、转化。不同实验方法和不同操作会导致同一个菌株的转化效率不同。前面的菌种后面长不起来，这种现象少见，不知道具体原因。重新转化转不进去，要么是感受态不行了，要么是转化没有做好。感受态不行了，重新做，或者找做超级感受态的方法，做好的感受态细胞-80度保存。 3、假阳性。因为amp的板子很容易长出来假阳性，所以务必要检测验证。得到的真克隆需长时间保存的话用甘油-80度冻存。 |
2楼2014-04-10 10:32:50
