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大肠杆菌 钙离子诱导转化 Amp筛选 重组质粒 已有1人参与
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| 我们这段时间一直在做大肠杆菌BL21的转化，采用的质粒是以PET32a质粒。前段时间转化成功了，留种后复苏在Amp液体培养基上不生长。此后按照前面转化成功的条件却转化不进去了。 |
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3楼2014-04-10 10:41:37
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zhang8826857: 金币+5, 鼓励。 2014-04-10 17:14:18
感谢参与，应助指数 +1
zhang8826857: 金币+5, 鼓励。 2014-04-10 17:14:18
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楼主提到的现象可能有几个方面的问题： 1、质粒。 这个大肠杆菌BL21的转化我们一般都是直接转已经做好的质粒。如果质粒是需要两个片段连接的，我们一般会现在EcoliDH5a中做好，然后提质粒转BL21。 2、转化。不同实验方法和不同操作会导致同一个菌株的转化效率不同。前面的菌种后面长不起来，这种现象少见，不知道具体原因。重新转化转不进去，要么是感受态不行了，要么是转化没有做好。感受态不行了，重新做，或者找做超级感受态的方法，做好的感受态细胞-80度保存。 3、假阳性。因为amp的板子很容易长出来假阳性，所以务必要检测验证。得到的真克隆需长时间保存的话用甘油-80度冻存。 |
2楼2014-04-10 10:32:50