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xuer0118

铜虫 (小有名气)

[交流] 请有经验的虫虫讲讲sephadex LH-20的用法!

用sephadex LH-20时,因为有溶胀,有时候过着过着柱子流速就降低了。而且我也不知道该怎么样选体系,硅胶柱可以用硅胶板选体系,sephadex LH-20怎么选体系呢?请有经验的虫虫讲讲sephadex LH-20的用法,谢谢!
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wizard579


tianruibencao(金币+1,VIP+0):谢谢指导
lh_20 是凝胶上键合了对脂类物质 有亲和的集团  溶剂的极性应该从大到小吧
2楼2008-02-29 18:30:40
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oliverwuwei

木虫 (小有名气)


tianruibencao(金币+1,VIP+0):谢谢指导
一般作凝胶色谱不变动洗脱剂,很多会做两根(一般用哈,特殊的除外),一根是丙酮柱,一根是甲醇柱,因为凝胶在不同溶剂中的溶胀系数不同,所以不变动洗脱剂。
3楼2008-02-29 21:56:20
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活着的灵魂

木虫 (小有名气)


tianruibencao(金币+1,VIP+0):谢谢指导
Sephadex LH20的分离原理主要有两方面:以凝胶过滤作用为主,兼具反相分配的作用(在反相溶剂中)。因为凝胶过滤作用,所以大分子的化合物保留弱,先被洗脱下来,小分子的化合物保留强,最后出柱。如果使用反相溶剂洗脱, Sephadex LH20对化合物还起反相分配的作用,所以极性大的化合物保留弱,先被洗脱下来,极性小的化合物保留强,后出柱。如果使用正相溶剂洗脱,这主要靠凝胶过滤作用来分离。
Sephadex LH20 洗脱溶剂。Sephadex LH20 洗脱溶剂因分为两类:反相和正相两种。用得最多的是反相溶剂洗脱,以甲醇--水系统最为常见,先用水,逐渐增加甲醇比例,最后用100%甲醇冲柱。正相系统以氯仿--甲醇最为常见,先用50%氯仿--甲醇,逐渐增加甲醇比例,最后用100%甲醇冲柱。
我的五棵松健康论坛www.LLLLL.com.cn
4楼2008-03-01 02:31:06
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糖丝丝

银虫 (小有名气)


tianruibencao(金币+1,VIP+0):谢谢指导
Sephadex LH20 不用的时候一般保存在纯甲醇里,我们实验室通常用的是氯仿-甲醇或纯甲醇作为洗脱剂,需要注意的是氯仿的比例不能超过50%,否则凝胶会飘起来。湿法上柱,上样前样品最好先用0.45um的滤膜滤一下,流速控制在14-15秒一滴。
5楼2008-03-13 09:45:26
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