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请教DEAE-sepharose FF?
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| DEAE-sepharose FF如何预处理,使用过后怎么样保存?我是刚刚做这方面的工作.所以一些浅显问题也不太懂,请诸位多指教.谢谢! |
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3楼2008-02-29 23:10:40
lxj341401
至尊木虫 (著名写手)
- BioEPI: 1
- 应助: 388 (硕士)
- 贵宾: 0.238
- 金币: 17138.7
- 红花: 43
- 帖子: 2251
- 在线: 712.4小时
- 虫号: 111074
- 注册: 2005-11-20
- 专业: 生物化学
2楼2008-02-28 20:17:53
gengln1983
银虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 716.3
- 帖子: 86
- 在线: 3.8小时
- 虫号: 273941
- 注册: 2006-08-20
- 专业: 细胞生物学研究中的新方法
| 我使用时一般是这样处理的：使用后清洗再生，先用2M的NaCl溶液以1mL/min反方向洗10-15min，可以除掉离子性结合的蛋白质。再用1M的NaOH溶液以1.2mL/min反方向冲洗100mL，可以去掉沉淀的蛋白质、疏水性结合的蛋白质和脂蛋白。再用70%的乙醇以1.2mL/min的速度反方向冲洗80ml，可以除去疏水性结合较强的蛋白质、脂蛋白和脂类。当用高浓度的有机物，应用增加的浓度梯度清洗，以避免形成气泡。当清洗完柱子后，用1M NaOH以1.2mL/min反方向洗30min，然后用大约100ml起始缓冲液重新平衡，以避免微生物污染。最后用20％的乙醇放在4℃保存。如果你觉得可能还会有其他蛋白吸附，可以在用乙醇洗后再用1M的盐酸和8M的尿素进行洗脱，然后再用1M NaOH清洗后平衡就可以继续使用，不用的话就用乙醇保存 |
4楼2008-04-01 10:20:44
