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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 酵母最常用的筛选标记 打算用Long Flanking Homology (LFH-)PCR法敲基因
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guxing.2010

铜虫 (初入文坛)

[求助] 酵母最常用的筛选标记 打算用Long Flanking Homology (LFH-)PCR法敲基因 已有1人参与

请问各位虫友，本人打算用Long Flanking Homology (LFH-)PCR法敲除酿酒酵母的个别基因，但是现在用G418做抗性筛选，感觉不靠谱（怀疑假阳性很高）。请问大家现在做酵母敲除常用的方法是什么？？如果是Long Flanking Homology (LFH-)PCR法，那应该常用的抗性标记是什么？？我的是工业菌株，二倍体，没有营养缺陷型。求虫友指导！
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1楼 2014-03-31 11:18:00
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guoqin_shiyin

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
G418可以用,大概200ug/ml就可以了,LFH也可以,一般40-50bp就可以,长一点更好.潮霉素也可以作为筛选标记,但是用的不多,G418用的最多.博来霉素zeocin可以用.
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2楼2014-03-31 21:14:50
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guxing.2010

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by guoqin_shiyin at 2014-03-31 21:14:50
G418可以用,大概200ug/ml就可以了,LFH也可以,一般40-50bp就可以,长一点更好.潮霉素也可以作为筛选标记,但是用的不多,G418用的最多.博来霉素zeocin可以用.

请问你用过的G418的假阳性多么？我的空白对照页长出很多菌来。我用的浓度500
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3楼2014-04-04 11:23:21
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