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鼠胚胎干细胞E14核型分析
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各位同仁: 我最近在做E14GT2A细胞的核型分析。结果一直不理想:(1)分裂相不多(2)染色体分散不开。 我的实验步骤如下:秋水仙素1ug/ml的终浓度,处理1小时。 离心(1700r,10min)收集细胞 用37°预热的0.075mol/l的KCL低渗,30min(最近试了一个小时的低渗;以前也试过5min); 直接加1-2ml新配置的固定液(固定液也有预热,大概15min),放置3min,离心(1700r, 10min),弃去上清。 加7ml固定液,作用10分钟,离心(1700r,10min) 再一次加7ml固定液,作用10分钟,离心(1700r,10min) 滴片。(两种滴法,都试了:垂直滴片,大概30cm高;直接滴到倾斜的玻片上,用嘴吹开) 85°,2小时,转入37°,烤片两天。 我现在是一筹莫展。各位大神小神,帮我看看,如何改进吧? |
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