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鼠胚胎干细胞E14核型分析
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各位同仁： 我最近在做E14GT2A细胞的核型分析。结果一直不理想：（1）分裂相不多（2）染色体分散不开。 我的实验步骤如下：秋水仙素1ug/ml的终浓度，处理1小时。 离心（1700r,10min）收集细胞 用37°预热的0.075mol/l的KCL低渗，30min（最近试了一个小时的低渗；以前也试过5min)； 直接加1-2ml新配置的固定液（固定液也有预热，大概15min)，放置3min，离心（1700r, 10min），弃去上清。 加7ml固定液，作用10分钟，离心（1700r,10min） 再一次加7ml固定液，作用10分钟，离心（1700r,10min） 滴片。（两种滴法，都试了：垂直滴片，大概30cm高；直接滴到倾斜的玻片上，用嘴吹开） 85°，2小时，转入37°，烤片两天。 我现在是一筹莫展。各位大神小神，帮我看看，如何改进吧？ |
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