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[交流]
鼠胚胎干细胞E14集落实验设计
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各位前辈，同仁：我最近要做关于干细胞的集落实验。但是我们实验室先前没有人做过。我完全没有头绪。有没有哪位大神可以扔一些相关资料？ 我们老师的意思是：将干细胞直接培养在STEM CELL 的一款甲基纤维素培养基里，形成EB，在加细胞因子进行诱导……我们实验室是做造血方面的研究。可是，我看了STEM CELL的一些指导。指导很简单。大概如下： step 1 Prepare Cells Process mouse cells by: ? ammonium chloride lysis ? density gradient separation ? progenitor cell enrichment with EasySep®, StemSep®, SpinSep® or FACS Wash cells (e.g. in Iscove’s MDM plus 2% FBS), then count and adjust cell concentration. step 2 Add Cells to MethoCult® Add cells to MethoCult® and vortex. Let tube stand to allow bubbles to dissipate. step 3 Plate and Incubate Dispense cells into pre-tested culture dishes using syringe and blunt-end needle. Incubate mouse cells for 7-14 days in humidified incubator at 37°C and 5% CO2. step 4 Count Colonies Count and evaluate colony types using inverted microscope and gridded scoring dishes. Alternatively, individual colonies may be plucked for routine staining, PCR, or cytogenetic analysis. 这个看起来似乎省略了很多步骤啊。有没有人做过？能否指点一个啊！！ |
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