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yongxiu2008木虫 (职业作家)
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做过二甲苯致小鼠耳肿胀的虫友们请进！已有2人参与
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想了解一下这个实验需要注意些什么？ 二甲苯的刺激量是多少呢？ |
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你好！我现在要做耳肿胀试验，小白一枚，有几个问题想请教一下。1、首先是二甲苯剂量问题。关于这个我看了很多文献剂量不一，最低20微升，高的有几百微升的，因此我做了一个小测试，发现20微升的二甲苯很快就致肿胀了，40微升的就有一些严重了，反而会导致左耳也有肿胀，因此我就选定的是20微升。2、其次是时间间隔问题。看文献从涂抹二甲苯到处死小鼠的时间间隔有30分钟到1小时不等，但我用二甲苯20微升很快小鼠耳朵就红肿，间隔也就2分钟左右。3、在以上基础，我做一次预实验，结果很奇怪阳性对照组反而出现的是阴性结果，样品组数据也不稳定。所以想在这个二甲苯剂量与时间间隔这方便请教一下，不知是否方便可以详细介绍一下这方面的选择。 |
3楼2017-07-12 20:55:12
yr397391476
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做过。有文献说用移液器吸取少量的二甲苯滴在小鼠耳廓上让其慢慢扩散，我们自己在做的时候发现这样做出来肿胀度不好且模型不稳定。 1、后面用移液器吸取0.05ml的二甲苯，用移液器的针头轻轻涂抹小鼠右耳朵正反面，这样会比文献上面的好点。 2、涂完二甲苯小鼠要放在没加垫料的笼子里面，不然小鼠会把耳朵往垫料上面蹭。 3、还有一点要注意的是涂完后小鼠不要放在空调房里，温度比较低这点很影响它的肿胀度，一般30~40分钟可达到最大肿胀度，超过90分钟肿胀消失，所以要在这个时间打打孔称重。 4、有三种种方法，有的是整个耳朵减下来称重，有的是耳朵减下来然后用6~8mm的打孔器称重，有的是不剪耳朵直接打孔称重。我用的是第二种方法，做出来数据还可以。 5、考虑你要做的实验来选择不同的致炎物质。二甲苯模型主要机制是致使某些炎症介质如组胺、激肽和纤维蛋白溶解释放，引起局部血管扩张，毛细管通透性增加，炎症细胞浸润，造成耳部急性渗出性炎症水肿。佛波酯诱导的小鼠耳肿胀模型的主要机能诱导小鼠耳组织角质形成细胞产生TNF-α,IL-1β等炎症细胞因子。另外TNF-α的存在会促进继发性炎症细胞因子生成，促使炎性反应进一步扩大。刺激磷脂酶诱导AA释放，代谢成为前列腺素E2(PGE2)和白三烯LTB4，加重炎症。促进组胺和5-羟色胺的释放。花生四烯酸诱导小鼠耳肿胀的机制主要为白三烯和其他脂肪氧化酶介导，而在白三烯存在的情况下前列腺素会促进小鼠耳肿胀。 辣椒素诱导的小鼠耳水肿的形成主要由神经肽介导，如降钙素基因相关肽、P物质、神经激肽A和血管活性肠肽。 希望对你有帮助。 |
2楼2014-04-22 13:36:55
yongxiu2008
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4楼2017-07-13 07:01:13
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请问是涂抹多长时间之后开始处死的？还有你们这是二甲苯量和时间是怎么确定的？是看参考文献，还是做了有预实验呢？感谢您的回复 发自小木虫Android客户端 |
5楼2017-07-16 16:59:04