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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » HPLC分离
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张凯丽.222

新虫 (初入文坛)

[求助] HPLC分离 已有5人参与

洗脱梯度是：乙腈-0.1%甲酸水
时间           乙腈
0                   5%
5                   8%
10                 20%
15                  20%
20                 25%
30                30%
40                 55%
怎么把8,9、11,12、22-25峰分开啊？

HPLC分离
IMG_1860[1].JPG
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1楼 2014-03-28 17:20:07
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fagui168

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
费姚永芬: 金币+2, 辛苦了 2014-03-29 13:20:38
你是做制备还是做分析，植被的话：这图是用制备柱跑的还是分析图，制备的话 你所说的都不好分离，用当前这个柱子，你只能将将相应的比例变化时间拉长，或是将相近的几个一块收集，然后再分别单独的分离纯化，注意控制好进样量；如果是做分析的话 觉得好像也没什么好的方法，只能将相应的比例时间拉长一些 试试。
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改变你不能改变的，适应你不能适应的
2楼2014-03-29 12:54:51
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炜少

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
20-25min降低有机相比例，35-40降低有机相比例。
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Whenthepainyoufeelsad,itisbesttolearnwhatthings.Learningwillmakeyouforeverremaininvincible.
3楼2014-03-29 13:26:50
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Action医生

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 炜少 at 2014-03-29 13:26:50
20-25min降低有机相比例，35-40降低有机相比例。

请问这是降低有机相，减少洗脱能力而出峰慢点么？
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每天进步一点点，给自己2h时间。
4楼2014-03-29 13:35:33
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月亮弯弯

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你换成2um色谱柱，同时用磷酸代替甲酸，也许你就成功分离了
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5楼2014-03-29 19:43:49
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wyy080214

实习版主 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
0-30  乙腈从5到25，你可以试试
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6楼2014-03-29 19:47:28
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炜少

木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by Action医生 at 2014-03-29 13:35:33
请问这是降低有机相，减少洗脱能力而出峰慢点么？...

是啊，洗脱能力降低，出峰时间延长
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Whenthepainyoufeelsad,itisbesttolearnwhatthings.Learningwillmakeyouforeverremaininvincible.
7楼2014-03-31 07:56:45
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kf1009

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你这个分离蛮好玩，组分较多。你选的体系不错，总体分离还可。如果不是LC-MS连用，甲酸换成磷酸也可以，波长280，甲酸也不影响什么，磷酸酸性比甲酸稍强，也许对部分组份分离有影响。不知你用的柱子，改用更高柱效的柱子也是可以尝试。降低有机相比例，提高流速，提高柱温也可以试试。我觉得你要考虑你的色谱系统延迟体积，再优化梯度。分离应该没问题，加油!
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快乐不需要走遍天涯去寻找，只需播一粒种子在脚下。
8楼2014-03-31 13:38:08
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Action医生

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 炜少 at 2014-03-31 07:56:45
是啊，洗脱能力降低，出峰时间延长...

谢谢
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每天进步一点点，给自己2h时间。
9楼2014-03-31 19:59:14
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张凯丽.222

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by fagui168 at 2014-03-29 12:54:51
你是做制备还是做分析，植被的话：这图是用制备柱跑的还是分析图，制备的话 你所说的都不好分离，用当前这个柱子，你只能将将相应的比例变化时间拉长，或是将相近的几个一块收集，然后再分别单独的分离纯化，注意控 ...

我做的是分析，试了好几个梯度，效果都不太明显，我想在请问一下，我用酶标仪做PNPG活性反应，为什么测定的空白比对应样品的OD值大呢？样品是黄酮化合物，检测波长315nm，谢谢啦
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10楼2014-04-11 13:14:20
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