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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 转基因 » 表达蛋白成功一次后就再也没有表达出来了，求高人指点
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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青山脚下

专家顾问

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！

[交流] 表达蛋白成功一次后就再也没有表达出来了，求高人指点

我是用BL21表达一种膜上的糖蛋白，这种蛋白可能对大肠杆菌有毒害，我只诱导成功一次，而且表达量也很少，但是再也诱导不出来，我重新活化菌，诱导条件37℃3h，IPTG浓度100uM,在OD达到0.6时开始诱导，有谁知道其中的原因吗？下面的图是我表达成功的

表达蛋白成功一次后就再也没有表达出来了，求高人指点
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一路向前，风雨无阻
1楼 2014-03-27 13:31:46
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softwind-77

兑换贵宾

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
青山脚下: 金币+5 2014-03-28 19:50:22
青山脚下: 金币+5 2014-09-22 08:47:31
膜上的蛋白一般疏水性比较强的吧，楼主可以对破碎的上清与沉淀都跑跑电泳看看，看看是否形成了包涵体，另外可以检查一下质粒情况，看看是不是存在质粒丢失或者突变情况
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2楼2014-03-27 16:03:15
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青山脚下

实习版主

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
引用回帖:
2楼: Originally posted by softwind-77 at 2014-03-27 16:03:15
膜上的蛋白一般疏水性比较强的吧，楼主可以对破碎的上清与沉淀都跑跑电泳看看，看看是否形成了包涵体，另外可以检查一下质粒情况，看看是不是存在质粒丢失或者突变情况

谢谢，但是我们老师说不可能，因为我是在-70℃中保存
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一路向前，风雨无阻
3楼2014-03-28 19:51:42
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青山脚下

版主

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
引用回帖:
3楼: Originally posted by 青山脚下 at 2014-03-28 19:51:42
谢谢，但是我们老师说不可能，因为我是在-70℃中保存...

现在，表达成功了，只要把OD控制在0.8-0.9之间就可以顺利表达成功蛋白，但是我也解释不了为什么
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一路向前，风雨无阻
4楼2014-09-22 10:19:56
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