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青山脚下

银虫 (小有名气)

[交流] 表达蛋白成功一次后就再也没有表达出来了,求高人指点

我是用BL21表达一种膜上的糖蛋白,这种蛋白可能对大肠杆菌有毒害,我只诱导成功一次,而且表达量也很少,但是再也诱导不出来,我重新活化菌,诱导条件37℃3h,IPTG浓度100uM,在OD达到0.6时开始诱导,有谁知道其中的原因吗?下面的图是我表达成功的

表达蛋白成功一次后就再也没有表达出来了,求高人指点
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一路向前,风雨无阻
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softwind-77

铜虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
青山脚下: 金币+5 2014-03-28 19:50:22
青山脚下: 金币+5 2014-09-22 08:47:31
膜上的蛋白一般疏水性比较强的吧,楼主可以对破碎的上清与沉淀都跑跑电泳看看,看看是否形成了包涵体,另外可以检查一下质粒情况,看看是不是存在质粒丢失或者突变情况
2楼2014-03-27 16:03:15
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青山脚下

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by softwind-77 at 2014-03-27 16:03:15
膜上的蛋白一般疏水性比较强的吧,楼主可以对破碎的上清与沉淀都跑跑电泳看看,看看是否形成了包涵体,另外可以检查一下质粒情况,看看是不是存在质粒丢失或者突变情况

谢谢,但是我们老师说不可能,因为我是在-70℃中保存
一路向前,风雨无阻
3楼2014-03-28 19:51:42
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青山脚下

银虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 青山脚下 at 2014-03-28 19:51:42
谢谢,但是我们老师说不可能,因为我是在-70℃中保存...

现在,表达成功了,只要把OD控制在0.8-0.9之间就可以顺利表达成功蛋白,但是我也解释不了为什么
一路向前,风雨无阻
4楼2014-09-22 10:19:56
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