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lindan0107

禁虫 (小有名气)
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1楼 2008-02-24 11:04:54
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annwt

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★
lindan0107(金币+6,VIP+0):没有说到我想要的！
^_^，大片段连接的确具有挑战性，我的看法是：
1，连接体系中载体与基因的浓度一定低，高了就不好连，作过反向PCR的都知道，
2，连接酶单位太多了应该也不好，Taq里有甘油，连接酶里也应该有，甘油多了反而酶活性低。
3，如果是导入细菌，最关键是感受态，大片段应该用超感，分子克隆上有方法，大片段进入细胞不太容易，操作时应该格外注意，尤其是热激后，可以等的时间长些，
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2楼2008-02-26 09:58:27
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lindan0107

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
3楼2008-02-26 20:29:36
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annwt

木虫 (正式写手)
我曾经连过2.4kb的，T载体只用0.5微升（说明书要求1微升）到0.3微升，至于反向PCR的问题，我问过成功人士，他们的经验是浓度越低越容易成功，这里可能涉及到化学问题，他也没有解释清楚，不过我的确没有记错。
赞一下 回复此楼
4楼2008-03-03 13:30:55
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