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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 转基因 » 求助连接转化问题
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tetsy-wzy

铜虫 (初入文坛)

[交流] 求助连接转化问题

请教各位有经验和有学识的人士，最近做连接问题，载体和目的片段连接，在转化前电泳跑胶鉴定是否连接成功，结果正确。转化时做阳性对照，阳性对照长菌很多，而且提质粒正确，但是转化连接产物，菌长的少，而且提质粒酶切鉴定不正确，这是怎么回事啊？找不到原因了，非常感谢您的援助之手！
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Thinkingbeforetalk
1楼 2014-03-24 10:35:13
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fish2251

新虫 (初入文坛)
连接产物转化菌长得少是正常的情况，我做的，要是连上的话常常就是4、5个，不是说越多越好。你说酶切鉴定不正确，是指大小不对吗？如果是大小不对，那就是你的目的片段有问题了。
还有，你说在转化前跑胶鉴定，是用连接产物跑的？？
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2楼2014-03-24 19:21:54
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tetsy-wzy

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by fish2251 at 2014-03-24 19:21:54
连接产物转化菌长得少是正常的情况，我做的，要是连上的话常常就是4、5个，不是说越多越好。你说酶切鉴定不正确，是指大小不对吗？如果是大小不对，那就是你的目的片段有问题了。
还有，你说在转化前跑胶鉴定，是用 ...

首先非常感谢你的帮助。是的，酶切的大小不对。但是阳性对照的也是之前连接好的同意目的片段和载体的质粒转化的。转化前跑胶鉴定是用连接产物，比如我做20ul的连接体系，10ul电泳跑胶，10ul转化
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Thinkingbeforetalk
3楼2014-03-25 08:45:43
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Neo2000

木虫 (著名写手)
连接产物跑电泳没有实质意义

[ 发自小木虫客户端 ]
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4楼2014-04-06 22:39:20
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