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新虫 (初入文坛)

[求助] EST序列的聚类、拼接以及纠错是怎样进行的,推荐使用那些软件?!

各位大神们,我是一个刚刚开始进行生物信息分析实验的本科生,我需要做一个宁夏枸杞ACS基因的电子克隆,但是貌似NCBI的数据库里没有我需要的EST序列,所以只能采用同科的番茄来进行电子克隆。
但是刚刚开始就遇到了很多的问题,自己学习了和了解很多关于电子克隆的相关内容,但是很多前辈说的比较深入,使得我不明白其中的一些具体步骤的操作问题,日夜的琢磨效率总也提不起来,我实在是没办法了,好无奈啊!真心想在最后作一篇优秀论文出来,所以想到应该在此求助各位大神细心指导一下,在下真心感激,感激不尽啊,我把我全部的金币都拿来作为奖励了。

在提主要问题之前,先请教一下大神几个概念的区别:1、聚类与拼接的具体关系和区别;2、unigene和unigene cluster;3、电子克隆时,在选择BLAST比对检索出来的序列时,需要注意哪些指标(或者是BLAST后结果中列表里显示的各个参数“Max score、Total score、Query cover、E value、Ident、Accession”符合怎样的范围才是最能选用的序列)?

我目前遇到的主要问题是:
1、找到一条相关的番茄ACS的EST序列,下一步是直接在NCBI的BLAST上进行相应对库检索,开始检索前,应该怎样选择检索数据库(选dbEST吗?还是默认就行?!)    找到相似度最高的一条序列之后将其与种子序列进行拼接,之后再BLAST,再拼接,直至无法再衍生,还是在拼接之前要对序列进行哪些处理呢?!
2、有的教材上说可以通过unigene检索EST以及下载unigene cluster之类的方法又是几个意思呢?!
3、在比对序列和构建进化树时,用MEGA6.0 应该比较合适的吧?!或者还需要其他什么软件吗?!
4、在聚类 拼接 序列时,大神推荐个拼接软件吧!最近看的资料和教材比较多,用的都是各种不同的软件,因为没用过Linux系统,只用window系统,我试着用过DANstar 的SeqMan来拼接序列。另一方面就是前面提到的拼接前需要对序列进行处理吗?!需要做哪些处理?!聚类和拼接的区分到底分别是哪几部分操作?!
问题有些多,没办法,实在是不得不问,不然做不出来啊!请大神多多教导啊!实在感激不尽!
目前最主要的疑问就是上述的,还有其他问题再和各位大神求助!我想好好做一篇毕业论文,希望大家多多帮助!对所有的帮助者我都十分感谢!
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