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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 我用非变性聚丙酰胺跑pcr产物，跑不出多态性
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yuanyuanlg01

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-03-24 18:52:22
楼主可以尝试一下用14的胶跑，电压120V，我看你的胶图条带拖尾很严重。你是想在胶图上看到明显的PCR多态性是吗？那你多态性的测试用的什么方法，不同多态性之间大概的带电量和分子量差别怎样，我仔细看了一下胶图，你marker的尾端很干净，但是PCR产物的尾端对比起来明显有拖痕。我没做过PCR产物的多态性实验，不过从胶图上看，我觉得你可以改变一下实验条件使得多态性尽可能明显，并且做一对正负control。电压调低一些减少拖痕。希望有所帮助，多多交流。
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11楼2014-03-24 17:49:41
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诸葛小汐

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

那可能是你的样品木有多态性

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12楼2014-03-24 18:11:05
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yangxp2006

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-03-31 22:21:37
snp的话，引物得设计酶切位点，酶切后再跑电泳，220bp用4%琼脂糖电泳就行

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13楼2014-03-25 23:21:55
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huangglen

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2014-03-26 12:32:45
直接pcr后电泳看多态性？何不做个rflp?我觉得楼主跑胶没问题。问题出在多态性检测方法

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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14楼2014-03-25 23:36:45
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BBMXM

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
14楼: Originally posted by huangglen at 2014-03-25 23:36:45
直接pcr后电泳看多态性？何不做个rflp?我觉得楼主跑胶没问题。问题出在多态性检测方法

我的序列上没有匹配的酶切位点，做不了rflp
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15楼2014-03-31 11:19:46
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yangxp2006

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
15楼: Originally posted by BBMXM at 2014-03-31 11:19:46
我的序列上没有匹配的酶切位点，做不了rflp...

dcaps，在引物上引入错配碱基，形成酶切位点，就可以了

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16楼2014-04-01 07:40:25
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BBMXM

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by biostar2009 at 2014-03-24 15:48:23
220nt，多态性还是碱基类型变了DNA长度没变化，12%的PAGE没有区别很正常。...

那怎么办，用什么方法区分多态性
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17楼2014-07-15 11:59:58
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