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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 培养/筛选 » 购买的厌氧菌活化失败，为什么，还有希望吗
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rose.no.9

木虫 (著名写手)

[求助] 购买的厌氧菌活化失败，为什么，还有希望吗 已有1人参与

在CGMCC和CICC购买的厌氧菌种，按照购买时候的说明操作，可是都已经三四天了，还是没有长出菌落来。有没有做过的同学，提示一下我该怎么办？卖家说可能需要重新购买，好几千块钱呢。。。。谢谢！！
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1楼 2014-03-11 21:27:11
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dllchina

木虫 (著名写手)

有机的微生物大神

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
rose.no.9: 金币+2, ★有帮助, 感谢回帖，算是个安慰吧，是在是急的没有办法，唉。。。难不成只能重新购买一次? 2014-03-12 20:07:28
你要看你的菌时哪年保藏的？如果时间很久了，也许是失活了。
还有厌氧菌我记得长得都很慢吧，楼主再等几天观察？
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2楼2014-03-12 00:50:27
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ctt1984

木虫 (正式写手)

初学者
把具体方法列出来帮你看看，连帮你分析的机会都不给，光在那淌眼泪了
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好好做事，踏实做人！
3楼2014-03-12 08:13:34
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rose.no.9

木虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by ctt1984 at 2014-03-12 08:13:34
把具体方法列出来帮你看看，连帮你分析的机会都不给，光在那淌眼泪了

购买的封在安瓿瓶中的冻干粉。操作如下：1.开封。在超净台中，酒精消毒，灼烧，滴无菌水，镊子敲碎。2.悬浮。用移液枪吸取400微升液体培养基（配方是购买菌种时附的）加入安瓿中，混匀。3.用一次无菌性注射器吸取200微升菌悬液，加入厌氧管中（内有斜面培养基，厌氧管是抽真空后充入氮气）。4.放入厌氧培养箱中培养，37℃。7号下午接种的，现在观察来看，有点絮状的东西在斜面边缘，加入的液体培养基也还是呈液体状。但是在斜面上没有看到菌落长出来，是不是我加入的菌悬液过多了？还是我原本应该用液体摇床进行活化？反正现在感觉是死灰一片。。。。。失望，不知道该怎么办。
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4楼2014-03-12 20:16:30
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ctt1984

木虫 (正式写手)

初学者
★ ★ ★ ★ ★
rose.no.9(dllchina代发): 金币+5, 谢谢热心应助 2014-03-13 10:42:44
dllchina: 回帖置顶 2014-03-13 10:42:52
引用回帖:
4楼: Originally posted by rose.no.9 at 2014-03-12 20:16:30
购买的封在安瓿瓶中的冻干粉。操作如下：1.开封。在超净台中，酒精消毒，灼烧，滴无菌水，镊子敲碎。2.悬浮。用移液枪吸取400微升液体培养基（配方是购买菌种时附的）加入安瓿中，混匀。3.用一次无菌性注射器吸取2 ...

一般来讲，商家卖给你的都是活化后分装给你的，理论上不会出错。我估计是你菌液涂多了，都长在一起形成菌膜了。要知道一管里面几亿个细菌，你还希望在那么小的斜面上长出单菌落，不太现实。建议你这么去做：
1，安培瓶中还有的话，取10ul的样子做10倍倍比稀释，分别涂平板，之后置于厌氧，37度培养，快的话24小时，慢的话也就48小时能长成单菌落。
2，安培瓶中没有的话，从你的厌氧管中用接种环轻轻挑一点，划线后置于厌氧，37度培养，待单菌落长出来后再纯培养
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好好做事，踏实做人！
5楼2014-03-13 08:28:55
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rose.no.9

木虫 (著名写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by ctt1984 at 2014-03-13 08:28:55
一般来讲，商家卖给你的都是活化后分装给你的，理论上不会出错。我估计是你菌液涂多了，都长在一起形成菌膜了。要知道一管里面几亿个细菌，你还希望在那么小的斜面上长出单菌落，不太现实。建议你这么去做：
1，安 ...

浓度太大？我真没想过这个因素。可能是以前没有做过冻干粉的活化吧。不过，6管中有一管存活了。你说的也是一个可能的原因，非常感谢，我会去试一试~
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6楼2014-03-13 20:08:13
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