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紫外吸收弱的糖一般如何做HPLC分析
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听说一般用视差折光检测器、灵敏度是不是要低一些？ [ Last edited by 佳怡 on 2009-4-24 at 21:20 ] |
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liu200479
木虫 (正式写手)
- 应助: 6 (幼儿园)
- 金币: 3120.2
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- 在线: 92.8小时
- 虫号: 463104
- 注册: 2007-11-19
- 性别: GG
- 专业: 天然药物化学
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蒸发光散射不能用缓冲盐。 由于糖类多为中性、极性和亲水性化合物，进行HPLC分离或GC分离之前必须先进行衍生，生成疏水性或挥发性化合物，而后用光度法或示差折光检测。对于单糖组成复杂的样品，糖类的衍生受到多种因素的影响，往往会造成衍生反应进行不彻底或生成多种衍生物，而且检测器的非选择性特征容易造成测定误差。毛细管电泳(CE) 可以实现单糖和糖醛酸的分离,但其灵敏度受进样量和检测器（紫外检测器）的限制，检出限>12 mg/L。HPLC测定糖类化合物时，由于糖本身在紫外区无吸收，多采用示差折光检测器检测，但示差折光检测器检测灵敏度低，且不能用于梯度洗脱。 积分安培离子色谱法(HPAEC-PAD)是近年发展起来的仪器分析方法，这种方法用于糖类的直接分离测定。HPAEC-PAD法通常是用强碱性的溶液作为洗脱液，在这种碱性的环境下，糖类的羟基(OH -)被离解成氧负离子的形式(O-),进行阴离子交换，根据不同糖类化合物pKa的差异引起的离子交换作用的差异以及某些糖类与阴离子交换树脂之间的疏水性相互作用的不同，实现糖类化合物的高效阴离子交换分离，然后根据糖类羟基在金电极表面发生氧化反应产生的电流大小实现糖类检测。 可以用离子色谱，检测灵敏度极高，但国内很少有仪器。 |
4楼2008-02-16 08:29:44