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novelty_ml

铁虫 (小有名气)

[交流] 请教【关于荧光分光光度法】

请教各位高手,我在用荧光分光光度计扫描某种物质看其有无荧光时,发现,固定激发光波长扫描,得到的最大荧光波长总与激发光波长一致;反之,固定发射光波长扫描时,得到的最大激发光波长总与发射光波长一致,请问这是怎么回事? 如果说明该物质无荧光,为什么总是在激发光与发射光一致时出峰?

[ Last edited by yensh on 2008-2-4 at 16:45 ]
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xmuwxd

金虫 (正式写手)

这明显是瑞利散射峰啊,可以扩大扫面范围,或者调解激发波长,尽量避开瑞利散射和拉曼散射。
2楼2008-02-10 12:43:23
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novelty_ml

铁虫 (小有名气)

谢谢!
可是一般发生瑞利散射的激发光波长在什么范围内呢?
我当时好像扫激发光范围为200-500nm,一直都是最大峰波长与固定的荧光波长相同。没有其它的峰,是不是可以说明这个物质就没有荧光呢?
3楼2008-02-11 20:53:47
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prime2003

银虫 (小有名气)

你可以把荧光物质的浓度调整一下,调整到10e-9至10e-5,浓度过高或过低都会影响检测(过低仪器检测不出,过高会有浓度猝灭现象)。
你现在检测到的最大峰波长应该就是各种散射产生的信号包括瑞利、丁铎尔和样品池散射等,在靠近激发光波长还会有拉曼散射峰。如果荧光峰及靠近激发光波长,上面说的这些信号会覆盖荧光峰。所以建议对未知样品检测,仪器的带宽适当调小些。

最后建议您看看《荧光分析法》这本书
4楼2008-02-14 09:07:13
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