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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » WB实验
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蓝默儿

金虫 (小有名气)

[求助] WB实验 已有4人参与

在WB实验中转膜时间与什么有关，转膜的电压？
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微笑，自信，加油
1楼 2014-03-05 20:46:40
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better8392

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
蓝默儿: 金币+1 2014-03-08 10:32:09
转膜时间与电压和你要转的蛋白大小以及胶的浓度有关。
一般不用太高的电压，那样产热比较多，蛋白容易降解。一般恒压的话我们都是用90 或95v。转一个半小时到两个小时，100kd以下的蛋白应该都可以。
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天行健君子以自强不息，地势坤君子以厚德载物
2楼2014-03-06 09:10:19
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蓝默儿

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by better8392 at 2014-03-06 09:10:19
转膜时间与电压和你要转的蛋白大小以及胶的浓度有关。
一般不用太高的电压，那样产热比较多，蛋白容易降解。一般恒压的话我们都是用90 或95v。转一个半小时到两个小时，100kd以下的蛋白应该都可以。

我看文献是多少伏都有，我是60KD，15V,45min
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微笑，自信，加油
3楼2014-03-08 10:46:47
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wodehao110

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
蓝默儿: 金币+1 2014-03-10 10:36:20
我们都是用横流300mA，转90分钟
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4楼2014-03-08 21:11:06
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stevenshi021

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
蓝默儿: 金币+1 2014-03-10 10:36:06
横流和恒压差不多，都可以。主要是看你转几块膜。转一张横流较好，转两张恒压较好。一般横流300mA,恒压90-100都行，转膜时间90min左右。小蛋白注意选择0.22um的膜（<15kD）.
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5楼2014-03-08 22:19:59
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better8392

木虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 蓝默儿 at 2014-03-08 10:46:47
我看文献是多少伏都有，我是60KD，15V,45min...

你的是湿转吗？我们是湿转的条件。如果你说的15V是湿转的条件，我觉得有点低。可能需要很长的时间，45分钟恐怕不够。也可能人家用的缓冲液和我们的不一样。
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天行健君子以自强不息，地势坤君子以厚德载物
6楼2014-03-09 10:40:50
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wenzi6337

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
蓝默儿: 金币+1 2014-03-10 09:29:49
蓝默儿: 金币+1 2014-03-27 10:21:27
Bio-Rad半干转膜仪20V，30min
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7楼2014-03-09 15:12:43
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