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蓝默儿

金虫 (小有名气)

[求助] WB实验 已有4人参与

在WB实验中转膜时间与什么有关,转膜的电压?
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微笑,自信,加油
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better8392

木虫 (小有名气)

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感谢参与,应助指数 +1
蓝默儿: 金币+1 2014-03-08 10:32:09
转膜时间与电压和你要转的蛋白大小以及胶的浓度有关。
一般不用太高的电压,那样产热比较多,蛋白容易降解。一般恒压的话我们都是用90 或95v。转一个半小时到两个小时,100kd以下的蛋白应该都可以。
天行健君子以自强不息,地势坤君子以厚德载物
2楼2014-03-06 09:10:19
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蓝默儿

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by better8392 at 2014-03-06 09:10:19
转膜时间与电压和你要转的蛋白大小以及胶的浓度有关。
一般不用太高的电压,那样产热比较多,蛋白容易降解。一般恒压的话我们都是用90 或95v。转一个半小时到两个小时,100kd以下的蛋白应该都可以。

我看文献是多少伏都有,我是60KD,15V,45min
微笑,自信,加油
3楼2014-03-08 10:46:47
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wodehao110

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


蓝默儿: 金币+1 2014-03-10 10:36:20
我们都是用横流300mA,转90分钟
4楼2014-03-08 21:11:06
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stevenshi021

新虫 (小有名气)

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蓝默儿: 金币+1 2014-03-10 10:36:06
横流和恒压差不多,都可以。主要是看你转几块膜。转一张横流较好,转两张恒压较好。一般横流300mA,恒压90-100都行,转膜时间90min左右。小蛋白注意选择0.22um的膜(<15kD).
5楼2014-03-08 22:19:59
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better8392

木虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 蓝默儿 at 2014-03-08 10:46:47
我看文献是多少伏都有,我是60KD,15V,45min...

你的是湿转吗?我们是湿转的条件。如果你说的15V是湿转的条件,我觉得有点低。可能需要很长的时间,45分钟恐怕不够。也可能人家用的缓冲液和我们的不一样。
天行健君子以自强不息,地势坤君子以厚德载物
6楼2014-03-09 10:40:50
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wenzi6337

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
蓝默儿: 金币+1 2014-03-10 09:29:49
蓝默儿: 金币+1 2014-03-27 10:21:27
Bio-Rad半干转膜仪20V,30min
7楼2014-03-09 15:12:43
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