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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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18252091017

管理员

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

[求助] 细胞培养 已有2人参与

本人昨天对两瓶血管平滑肌细胞进行传代,0.25%胰酶消化。
A瓶(细胞库培养瓶)细胞有的开始回缩变形,未见细胞脱落悬浮,倾倒胰酶,加入4ml培养基终止消化,吹打,镜下观察。大部分细胞脱落,少部分未脱落。
B瓶(我们本实验室培养瓶)细胞有的开始回缩变圆,个别细胞脱落悬浮,倾倒胰酶,加入4m培养基终止消化,吹打,镜下观察。少部分细胞脱落,仍有大部分未脱落。
然后分别从A、B瓶吸取2ml细胞液至新的培养瓶C中,培养。
今早观察:C瓶几乎无细胞贴壁,A、B两瓶有细胞贴壁,状态伸展,但细胞贴壁不均匀。
问题:C瓶为什么没细胞贴壁啊?A、B两瓶贴的细胞是原有未吹打下来的细胞伸展开来形成的,消化下来的那些细胞根本就都没贴上?
唉,求战友指点!!!拜谢!
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lywinan

禁虫

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
可能细胞贴附能力较强,与瓶结合紧,胰酶消化时间久了,消化过度,影响传代后细胞贴附,建议加入EDTA辅助消化;
也有可能细胞对胰酶敏感,虽然加入培养基(要含血清哦)终止消化,但是残留的消化液对传代后细胞仍有影响,建议吹打后离心,使用培养基重悬细胞,完全去除消化液;
综上,使用胰酶+EDTA消化细胞,避免长时间消化,终止消化后离心,使用培养基重悬细胞并分瓶。
祝好!
2楼2014-03-03 16:27:31
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18252091017

实习版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

引用回帖:
2楼: Originally posted by lywinan at 2014-03-03 16:27:31
可能细胞贴附能力较强,与瓶结合紧,胰酶消化时间久了,消化过度,影响传代后细胞贴附,建议加入EDTA辅助消化;
也有可能细胞对胰酶敏感,虽然加入培养基(要含血清哦)终止消化,但是残留的消化液对传代后细胞仍有 ...

你好,感谢你的回复。
0.25%胰酶中含有0.02%的EDTA,消化时间约1min。
消化后,对胰酶进行倾倒,是不是仅有的一点胰酶还是会有影响?终止消化后离心,离心会不会对细胞有损伤啊?
C瓶几乎无细胞贴壁,是细胞对新瓶子不适应吗?但是本实验室培养瓶和细胞库细胞瓶为一个型号啊……
3楼2014-03-04 09:08:50
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lywinan

禁虫

引用回帖:
3楼: Originally posted by 18252091017 at 2014-03-04 09:08:50
你好,感谢你的回复。
0.25%胰酶中含有0.02%的EDTA,消化时间约1min。
消化后,对胰酶进行倾倒,是不是仅有的一点胰酶还是会有影响?终止消化后离心,离心会不会对细胞有损伤啊?
C瓶几乎无细胞贴壁,是细胞对新 ...

残留的消化液中胰酶或EDTA都可能对细胞产生影响,离心的话有专门的细胞离心管,常温低速离心,比如3000rpm离心10min,不会对细胞造成伤害的,倾倒上清后用培养基重悬细胞,轻轻吹打。一般不是特殊的细胞,不需要对细胞瓶子特别处理的,商品化的瓶子都可以用的,不过用过的比没用过的易于贴附~~~
4楼2014-03-04 13:55:37
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18252091017

兑换贵宾

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

引用回帖:
4楼: Originally posted by lywinan at 2014-03-04 13:55:37
残留的消化液中胰酶或EDTA都可能对细胞产生影响,离心的话有专门的细胞离心管,常温低速离心,比如3000rpm离心10min,不会对细胞造成伤害的,倾倒上清后用培养基重悬细胞,轻轻吹打。一般不是特殊的细胞,不需要对 ...

嗯,目前另两个瓶子即A、B瓶细胞状态还行,比较伸展,但长得比较缓慢,前天传代,昨天换液,今天观察时,细胞也就铺了30%~40%的样子吧。有什么方法可以使其长得快点吗?还是说不要动它,在培养箱里先养个2、3天,再看看。
而且,细胞生长不均匀,是因为吹打时有些部位没有吹打下来的原因吗?
5楼2014-03-04 16:39:18
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hbchenlin

兑换贵宾

silicare: 屏蔽内容, 违规存档 2014-03-06 19:12:00
本帖内容被屏蔽

6楼2014-03-06 15:53:19
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zhx1912

版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

【答案】应助回帖

首先我有一点不明,为何从A,B两瓶分别取部分细胞到C瓶?而且A,B两瓶都是部分消化。。。

看了你的结果,我初步判断为消化不充分,脱落细胞有可能是已经凋亡的细胞,加消化液前有没有加PBS洗细胞呢?
功到自然成!
7楼2014-03-07 09:04:59
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18252091017

管理员

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

引用回帖:
7楼: Originally posted by zhx1912 at 2014-03-07 09:04:59
首先我有一点不明,为何从A,B两瓶分别取部分细胞到C瓶?而且A,B两瓶都是部分消化。。。

看了你的结果,我初步判断为消化不充分,脱落细胞有可能是已经凋亡的细胞,加消化液前有没有加PBS洗细胞呢?

消化前细胞贴壁状态良好,消化时为防止细胞消化过度,所以一旦有细胞回缩变形,立即就对它进行了处理。
消化前,用2mlPBS清洗了两遍。
因为感觉消化下来的部分不多,也就占一半吧,所以就从A、B两瓶分别取一半细胞液加入C瓶。
8楼2014-03-07 14:32:20
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zhx1912

实习版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

【答案】应助回帖

我一般加5ml Pbs洗一遍,这个过程不能太慢,时间长了细胞也会有影响的,另外你养的什么细胞?很难消化吗?

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
功到自然成!
9楼2014-03-08 08:18:01
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