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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » 细胞培养
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18252091017

新虫 (初入文坛)

[求助] 细胞培养 已有2人参与

本人昨天对两瓶血管平滑肌细胞进行传代，0.25%胰酶消化。
A瓶（细胞库培养瓶）细胞有的开始回缩变形，未见细胞脱落悬浮，倾倒胰酶，加入4ml培养基终止消化，吹打，镜下观察。大部分细胞脱落，少部分未脱落。
B瓶（我们本实验室培养瓶）细胞有的开始回缩变圆，个别细胞脱落悬浮，倾倒胰酶，加入4m培养基终止消化，吹打，镜下观察。少部分细胞脱落，仍有大部分未脱落。
然后分别从A、B瓶吸取2ml细胞液至新的培养瓶C中，培养。
今早观察：C瓶几乎无细胞贴壁，A、B两瓶有细胞贴壁，状态伸展，但细胞贴壁不均匀。
问题：C瓶为什么没细胞贴壁啊？A、B两瓶贴的细胞是原有未吹打下来的细胞伸展开来形成的，消化下来的那些细胞根本就都没贴上？
唉，求战友指点！！！拜谢！
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1楼 2014-03-03 10:31:47
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lywinan

捐助贵宾 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可能细胞贴附能力较强，与瓶结合紧，胰酶消化时间久了，消化过度，影响传代后细胞贴附，建议加入EDTA辅助消化；
也有可能细胞对胰酶敏感，虽然加入培养基（要含血清哦）终止消化，但是残留的消化液对传代后细胞仍有影响，建议吹打后离心，使用培养基重悬细胞，完全去除消化液；
综上，使用胰酶+EDTA消化细胞，避免长时间消化，终止消化后离心，使用培养基重悬细胞并分瓶。
祝好！
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2楼2014-03-03 16:27:31
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18252091017

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lywinan at 2014-03-03 16:27:31
可能细胞贴附能力较强，与瓶结合紧，胰酶消化时间久了，消化过度，影响传代后细胞贴附，建议加入EDTA辅助消化；
也有可能细胞对胰酶敏感，虽然加入培养基（要含血清哦）终止消化，但是残留的消化液对传代后细胞仍有 ...

你好，感谢你的回复。
0.25%胰酶中含有0.02%的EDTA，消化时间约1min。
消化后，对胰酶进行倾倒，是不是仅有的一点胰酶还是会有影响？终止消化后离心，离心会不会对细胞有损伤啊？
C瓶几乎无细胞贴壁，是细胞对新瓶子不适应吗？但是本实验室培养瓶和细胞库细胞瓶为一个型号啊……
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3楼2014-03-04 09:08:50
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lywinan

捐助贵宾 (职业作家)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 18252091017 at 2014-03-04 09:08:50
你好，感谢你的回复。
0.25%胰酶中含有0.02%的EDTA，消化时间约1min。
消化后，对胰酶进行倾倒，是不是仅有的一点胰酶还是会有影响？终止消化后离心，离心会不会对细胞有损伤啊？
C瓶几乎无细胞贴壁，是细胞对新 ...

残留的消化液中胰酶或EDTA都可能对细胞产生影响，离心的话有专门的细胞离心管，常温低速离心，比如3000rpm离心10min，不会对细胞造成伤害的，倾倒上清后用培养基重悬细胞，轻轻吹打。一般不是特殊的细胞，不需要对细胞瓶子特别处理的，商品化的瓶子都可以用的，不过用过的比没用过的易于贴附~~~
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4楼2014-03-04 13:55:37
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18252091017

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by lywinan at 2014-03-04 13:55:37
残留的消化液中胰酶或EDTA都可能对细胞产生影响，离心的话有专门的细胞离心管，常温低速离心，比如3000rpm离心10min，不会对细胞造成伤害的，倾倒上清后用培养基重悬细胞，轻轻吹打。一般不是特殊的细胞，不需要对 ...

嗯，目前另两个瓶子即A、B瓶细胞状态还行，比较伸展，但长得比较缓慢，前天传代，昨天换液，今天观察时，细胞也就铺了30%~40%的样子吧。有什么方法可以使其长得快点吗？还是说不要动它，在培养箱里先养个2、3天，再看看。
而且，细胞生长不均匀，是因为吹打时有些部位没有吹打下来的原因吗？
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5楼2014-03-04 16:39:18
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hbchenlin

铁虫 (小有名气)
silicare: 屏蔽内容, 违规存档 2014-03-06 19:12:00
本帖内容被屏蔽
6楼2014-03-06 15:53:19
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zhx1912

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

首先我有一点不明，为何从A，B两瓶分别取部分细胞到C瓶？而且A，B两瓶都是部分消化。。。

看了你的结果，我初步判断为消化不充分，脱落细胞有可能是已经凋亡的细胞，加消化液前有没有加PBS洗细胞呢？
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功到自然成！
7楼2014-03-07 09:04:59
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18252091017

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by zhx1912 at 2014-03-07 09:04:59
首先我有一点不明，为何从A，B两瓶分别取部分细胞到C瓶？而且A，B两瓶都是部分消化。。。

看了你的结果，我初步判断为消化不充分，脱落细胞有可能是已经凋亡的细胞，加消化液前有没有加PBS洗细胞呢？

消化前细胞贴壁状态良好，消化时为防止细胞消化过度，所以一旦有细胞回缩变形，立即就对它进行了处理。
消化前，用2mlPBS清洗了两遍。
因为感觉消化下来的部分不多，也就占一半吧，所以就从A、B两瓶分别取一半细胞液加入C瓶。
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8楼2014-03-07 14:32:20
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zhx1912

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我一般加5ml Pbs洗一遍，这个过程不能太慢，时间长了细胞也会有影响的，另外你养的什么细胞？很难消化吗？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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功到自然成！
9楼2014-03-08 08:18:01
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