应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » 细胞培养
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
91/1返回列表
查看: 854  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

18252091017

管理员

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！

[求助] 细胞培养 已有2人参与

本人昨天对两瓶血管平滑肌细胞进行传代，0.25%胰酶消化。
A瓶（细胞库培养瓶）细胞有的开始回缩变形，未见细胞脱落悬浮，倾倒胰酶，加入4ml培养基终止消化，吹打，镜下观察。大部分细胞脱落，少部分未脱落。
B瓶（我们本实验室培养瓶）细胞有的开始回缩变圆，个别细胞脱落悬浮，倾倒胰酶，加入4m培养基终止消化，吹打，镜下观察。少部分细胞脱落，仍有大部分未脱落。
然后分别从A、B瓶吸取2ml细胞液至新的培养瓶C中，培养。
今早观察：C瓶几乎无细胞贴壁，A、B两瓶有细胞贴壁，状态伸展，但细胞贴壁不均匀。
问题：C瓶为什么没细胞贴壁啊？A、B两瓶贴的细胞是原有未吹打下来的细胞伸展开来形成的，消化下来的那些细胞根本就都没贴上？
唉，求战友指点！！！拜谢！
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2014-03-03 10:31:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lywinan

禁虫

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可能细胞贴附能力较强，与瓶结合紧，胰酶消化时间久了，消化过度，影响传代后细胞贴附，建议加入EDTA辅助消化；
也有可能细胞对胰酶敏感，虽然加入培养基（要含血清哦）终止消化，但是残留的消化液对传代后细胞仍有影响，建议吹打后离心，使用培养基重悬细胞，完全去除消化液；
综上，使用胰酶+EDTA消化细胞，避免长时间消化，终止消化后离心，使用培养基重悬细胞并分瓶。
祝好！
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2014-03-03 16:27:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

18252091017

实习版主

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
引用回帖:
2楼: Originally posted by lywinan at 2014-03-03 16:27:31
可能细胞贴附能力较强，与瓶结合紧，胰酶消化时间久了，消化过度，影响传代后细胞贴附，建议加入EDTA辅助消化；
也有可能细胞对胰酶敏感，虽然加入培养基（要含血清哦）终止消化，但是残留的消化液对传代后细胞仍有 ...

你好，感谢你的回复。
0.25%胰酶中含有0.02%的EDTA，消化时间约1min。
消化后，对胰酶进行倾倒，是不是仅有的一点胰酶还是会有影响？终止消化后离心，离心会不会对细胞有损伤啊？
C瓶几乎无细胞贴壁，是细胞对新瓶子不适应吗？但是本实验室培养瓶和细胞库细胞瓶为一个型号啊……
赞一下 回复此楼
3楼2014-03-04 09:08:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lywinan

禁虫
引用回帖:
3楼: Originally posted by 18252091017 at 2014-03-04 09:08:50
你好，感谢你的回复。
0.25%胰酶中含有0.02%的EDTA，消化时间约1min。
消化后，对胰酶进行倾倒，是不是仅有的一点胰酶还是会有影响？终止消化后离心，离心会不会对细胞有损伤啊？
C瓶几乎无细胞贴壁，是细胞对新 ...

残留的消化液中胰酶或EDTA都可能对细胞产生影响，离心的话有专门的细胞离心管，常温低速离心，比如3000rpm离心10min，不会对细胞造成伤害的，倾倒上清后用培养基重悬细胞，轻轻吹打。一般不是特殊的细胞，不需要对细胞瓶子特别处理的，商品化的瓶子都可以用的，不过用过的比没用过的易于贴附~~~
赞一下 回复此楼
4楼2014-03-04 13:55:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

18252091017

兑换贵宾

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
引用回帖:
4楼: Originally posted by lywinan at 2014-03-04 13:55:37
残留的消化液中胰酶或EDTA都可能对细胞产生影响，离心的话有专门的细胞离心管，常温低速离心，比如3000rpm离心10min，不会对细胞造成伤害的，倾倒上清后用培养基重悬细胞，轻轻吹打。一般不是特殊的细胞，不需要对 ...

嗯，目前另两个瓶子即A、B瓶细胞状态还行，比较伸展，但长得比较缓慢，前天传代，昨天换液，今天观察时，细胞也就铺了30%~40%的样子吧。有什么方法可以使其长得快点吗？还是说不要动它，在培养箱里先养个2、3天，再看看。
而且，细胞生长不均匀，是因为吹打时有些部位没有吹打下来的原因吗？
赞一下 回复此楼
5楼2014-03-04 16:39:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hbchenlin

兑换贵宾
silicare: 屏蔽内容, 违规存档 2014-03-06 19:12:00
本帖内容被屏蔽
6楼2014-03-06 15:53:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhx1912

版主

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！

【答案】应助回帖

首先我有一点不明，为何从A，B两瓶分别取部分细胞到C瓶？而且A，B两瓶都是部分消化。。。

看了你的结果，我初步判断为消化不充分，脱落细胞有可能是已经凋亡的细胞，加消化液前有没有加PBS洗细胞呢？
赞一下 回复此楼
功到自然成！
7楼2014-03-07 09:04:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

18252091017

管理员

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
引用回帖:
7楼: Originally posted by zhx1912 at 2014-03-07 09:04:59
首先我有一点不明，为何从A，B两瓶分别取部分细胞到C瓶？而且A，B两瓶都是部分消化。。。

看了你的结果，我初步判断为消化不充分，脱落细胞有可能是已经凋亡的细胞，加消化液前有没有加PBS洗细胞呢？

消化前细胞贴壁状态良好，消化时为防止细胞消化过度，所以一旦有细胞回缩变形，立即就对它进行了处理。
消化前，用2mlPBS清洗了两遍。
因为感觉消化下来的部分不多，也就占一半吧，所以就从A、B两瓶分别取一半细胞液加入C瓶。
赞一下 回复此楼
8楼2014-03-07 14:32:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhx1912

实习版主

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！

【答案】应助回帖

我一般加5ml Pbs洗一遍，这个过程不能太慢，时间长了细胞也会有影响的，另外你养的什么细胞？很难消化吗？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
功到自然成！
9楼2014-03-08 08:18:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 18252091017 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿085600中科院宁波所276分求调剂 +16 材料学257求调剂 2026-03-28 17/850 2026-04-01 01:32 by 1018329917
[考研] 324分 085600材料与化工 +9 呆鹅oor 2026-03-27 9/450 2026-04-01 00:46 by fmesaito
[电化学] 070300化学调剂 +7 山顶见α 2026-03-25 7/350 2026-03-31 22:21 by piaoyi415
[考研] 一志愿北化085600材料专硕275|有文章专利｜求调剂 +16 Micky11223 2026-03-25 17/850 2026-03-31 22:04 by 544594351
[考研] 349求调剂 +4 zwjjjjjj 2026-03-31 4/200 2026-03-31 21:00 by yuq
[考研] 材料工程085601数二英一335求调剂 +5 双马尾痞老板2 2026-03-31 5/250 2026-03-31 19:07 by Wang200018
[考研] 286分调剂 +11 Faune 2026-03-30 13/650 2026-03-31 17:28 by michael2011
[考研] 机械学硕总分317求调剂！！！！ +6 Acaciad 2026-03-25 6/300 2026-03-31 16:52 by asdfzly
[基金申请] 面上5B能上会吗？ +8 redcom 2026-03-29 8/400 2026-03-31 15:53 by niuailing
[考研] 一志愿哈尔滨工业大学材料与化工方向336分 +13 辰沐5211314 2026-03-26 13/650 2026-03-31 14:37 by 记事本2026
[考研] 334求调剂 +7 Trying] 2026-03-31 7/350 2026-03-31 12:33 by 无际的草原
[考研] 一志愿大连理工大学，机械工程学硕，341 +3 西瓜田的守望者 2026-03-30 3/150 2026-03-31 11:08 by asdfzly
[考研] 266求调剂 +3 哇呼哼呼哼 2026-03-29 3/150 2026-03-31 10:06 by cal0306
[考研] 083000学硕274求调剂 +12 Li李鱼 2026-03-26 12/600 2026-03-31 10:01 by cal0306
[考研] 0856调剂 +6 曲听筠 2026-03-30 6/300 2026-03-31 09:44 by Jaylen.
[考研] 291求调剂 +12 Y-cap 2026-03-29 15/750 2026-03-31 09:25 by Huaxue_Wang
[考研] 298求调剂 +3 什么是胖头鱼 2026-03-30 5/250 2026-03-30 14:41 by 青海小西牛
[考研] 337求调剂 +6 《树》 2026-03-29 6/300 2026-03-30 10:15 by herarysara
[考研] 0703化学338求调剂！ +6 Zuhui0306 2026-03-26 7/350 2026-03-27 10:35 by shangxh
[考研] 各位老师您好：本人初试372分 +5 jj涌77 2026-03-25 6/300 2026-03-25 14:15 by mapenggao
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭