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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 培养/筛选 » 纤维素崩解实验滤纸不溃烂？
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mashuge

银虫 (小有名气)

[求助] 纤维素崩解实验滤纸不溃烂？ 已有3人参与

我也做了滤纸溃烂实验的那些菌长了，而且菌液很浓但是滤纸还是完好，有的菌是附着在滤纸上的，我用的培养基是蛋白胨5g/L，滤纸，水，pH7.0左右，考虑是不是我再用胨水做个空白，看接进去后该菌是否生长？还有我是不会是可以在立体显微镜下看空白和较浓菌液中的滤纸有无变化，还有在摇床上空白对照中有纤维素丝，但菌液已看不出有纤维丝了，能否说明能够利用滤纸了呢？蛋白胨成分不明确的话，我用尿素代替蛋白胨可以吗？有哪位大神不吝赐教？
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1楼 2014-03-03 08:50:40
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orangeleaf

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
测下有没有纤维素酶酶活。。。
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工业酶-T180;AU-400FLD;B85vanguard;E3-1280v3;NH-D9L;8GBx2;R7-250A-ZLH4;Black500GB;EA191M;SK-8115;M111s
2楼2014-03-03 15:59:37
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fqf93

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
mashuge: 金币+1, ★有帮助 2014-03-04 09:14:30
mashuge(dllchina代发): 金币+2, good 2014-03-04 15:30:27
蛋白胨本身就是一种碳源，在你的培养基中滤纸不是单一碳源，所以应该修改你的培养基，最好用无机碳源
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3楼2014-03-03 19:58:12
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fqf93

铜虫 (初入文坛)
说错了，是无机氮源
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4楼2014-03-03 20:28:40
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mashuge

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by fqf93 at 2014-03-03 19:58:12
蛋白胨本身就是一种碳源，在你的培养基中滤纸不是单一碳源，所以应该修改你的培养基，最好用无机碳源

我改成硫酸铵试试，谢谢你
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5楼2014-03-04 09:10:03
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mashuge

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by orangeleaf at 2014-03-03 15:59:37
测下有没有纤维素酶酶活。。。

在初筛的时候的水解圈都很大的，所以就想看看滤纸溃烂程度，此实验简单并能定性的反映纤维素的酶活活性，我还没有测酶活，你测过吗？用的什么方法？
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6楼2014-03-04 09:13:37
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无极LHT

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
葡萄糖标准曲线
标准葡萄糖溶液：葡萄糖在108℃烘箱内烘干30min~1h后，配置1.037g/ml浓度葡萄糖溶液，再分别取0ml、0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml、1.2ml、1.4ml葡萄糖溶液用蒸馏水稀释至2ml，加入3mlDNS试剂沸水浴10min,立即用冷水终止反应，另用0ml，在波长为540nm下测定光吸收值(OD值)，光吸收值作为纵坐标，以葡萄糖含量作为横坐标，绘制出葡萄糖标准曲线及曲线方程式[71]。
酶活力按国际单位的定义是：每min催化水解生成1μmol葡萄糖的酶量为一个酶活力单位IU。
2.2.2.2 滤纸酶活的测定
DNS法：
    取1ml菌液在6000r的离心机中离心10min，弃去沉淀，加入滤纸底物溶液。 在50℃恒温水浴锅中反应1h。反应后加入3mlDNS溶液，放于沸水浴中煮沸10min，用冷水立即终止反应。在波长为540nm下测定光吸收值(OD值)。根据葡萄糖标准曲线测算滤纸酶的活性。对照为菌液沸水10min，立即冷水冷却。每个样做三个平行[28]。
CMC酶活的测定
DNS法：
    取1ml菌液在6000r的离心机中离心10min，弃去沉淀，加入CMC底物溶液。 在50℃恒温水浴锅中反应30min。反应后加入3mlDNS溶液，放于沸水浴中煮沸10min，用冷水立即终止反应。在波长为540nm下测定光吸收值(OD值)。根据葡萄糖标准曲线测算滤纸酶的活性。对照为菌液沸水10min，立即冷水冷却。每个样做三个平行。
微精纤维素酶活的测定
    取1ml菌液在6000r的离心机中离心10min，弃去沉淀，加入微精纤维素底物溶液。 在50℃恒温水浴锅中反应2h。反应后加入3mlDNS溶液，放于沸水浴中煮沸10min，用冷水立即终止反应。在波长为540nm下测定光吸收值(OD值)。根据葡萄糖标准曲线测算滤纸酶的活性。对照为菌液沸水10min，立即冷水冷却。每个样做三个平行。
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7楼2014-03-05 15:51:35
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mashuge

银虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 无极LHT at 2014-03-05 15:51:35
葡萄糖标准曲线
标准葡萄糖溶液：葡萄糖在108℃烘箱内烘干30min~1h后，配置1.037g/ml浓度葡萄糖溶液，再分别取0ml、0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml、1.2ml、1.4ml葡萄糖溶液用蒸馏水稀释至2ml，加入3mlDNS试剂 ...

，配置1.037g/ml浓度葡萄糖溶液，再分别取0ml、0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml、1.2ml、1.4ml葡萄糖溶液用蒸馏水稀释至2ml，加入3mlDNS试剂沸水浴10min,立即用冷水终止。
你的1.037g/ml的单位对吗？还有你是加完DNS为什么沸水浴10min,我看的文献多是5min，还有沸水浴冷却后你是直接测定的吗？没有再稀释了吗？
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8楼2014-03-06 16:59:14
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mashuge

银虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 无极LHT at 2014-03-05 15:51:35
葡萄糖标准曲线
标准葡萄糖溶液：葡萄糖在108℃烘箱内烘干30min~1h后，配置1.037g/ml浓度葡萄糖溶液，再分别取0ml、0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml、1.2ml、1.4ml葡萄糖溶液用蒸馏水稀释至2ml，加入3mlDNS试剂 ...

我在测定标准曲线的时候遇到些问题
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9楼2014-03-06 17:00:20
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