| 查看: 846 | 回复: 20 | ||
| 【奖励】 本帖被评价17次，作者sunzuoming增加金币 10.75 个 | ||
| 当前主题已经存档。 | ||
[资源]
色谱双峰产生的可能及判断和处理
|
||
|
HPLC分析中，在色谱柱正常，样品灵敏度足够，分析方法合适，色谱峰在出峰时间较短的条件下（不包括梯度），峰型应对称而尖锐。但是，在对样品了解程度不够，方法不妥，样品处理方法及进样方式不合理下，会出现各种意想不到的问题，而对色谱峰难以作出合理的解释，尤其对于新手更是如此。下面根据本人几年工作的体会，提出一些看法，向同仁指教。 色谱双峰指的是明是一种物质，但在色谱图中出现双峰，而表明含二种物质。我将这种情况分为四种原因。 1 色谱柱 如果你分析样品时发现每个色谱峰都双峰出现（出峰越快，双峰的可能性会减少），尤其采用单一纯物质时，可以肯定色谱柱出问题－柱头受损或柱头固定相变脏或流失。如果进样量少，原来色谱柱正常，色谱峰的形状多为一大峰带一小峰，不一定拖尾，这一般应是柱头受堵，将色谱柱反过来接，用流动相冲洗或酸洗或其它溶剂，将堵在柱头的残留物冲掉，再反过来，一般情况下就行了。当然不反冲，正冲有时也会正常的。如果峰拖尾，双峰强弱相差不大，柱头固定相变脏或流失可能性更大，这是可以将进样那头拧开，将微孔滤片超声，柱头刮去一部分填料，重新填上新填料拧紧，不过这种活，需要一定技术，同时不能老干那种事，否则用不了几次，色谱柱就会应柱效很低而报废。 2 溶剂极性及进样量 许多HPLC分析者对此可能不以为然，一般的HPLC的书籍和文献都不会提到这方面的内容，而这确是双峰产生的一个很重要的原因。目前HPLC分析多为反相色谱，流动相多为甲醇、乙腈、水，加各种添加剂以改善分离性能。样品一般用与流动相相溶的溶剂溶解。最佳的溶解方法是用流动相溶解，但是很多情况是不一致的。当用溶剂极性强度大的试剂，如纯甲醇、纯乙腈，纯乙醇，而分析体系中以水为主，样品进样量大，如定量管为20ul，此条件下完全可以肯定，单一的纯物质出双峰，第二峰比第一峰小（每次都不太一样），且拖尾，保留时间会提前(相对进样量少而言)，将进样量减少一半以上，峰型将变为正常。这是样品的溶剂与流动相极性相差太大，而流动相来不及将其稀释达到平衡造成的。上面提到进样量造成双峰的一个原因，另一个原因是，进样量不一定大，但绝对量很大，色谱图上的双峰紧靠在一起，基本上齐高，不拖尾（如果出峰很快，也可能是色谱柱问题）。将样品稀释再进样就可以了，这是由于进样量过大，色谱柱过载造成的。 3 样品的特性 有些样品由于其化学结构的特点，存在互变异构现象，而这种互变异构体无法分开，而是以一个动态平衡存在。在色谱分析时，在一个特定的条件下，一种物质将出现双峰，双峰靠的很近，基本齐高，不拖尾，条件稍一变化，尤其pH，双峰现象将消失，如红霉素等。有的样品紫外的色谱图上看不到双峰，但在LC－MS下，用质谱检测器，其质谱的总离子流图上较明显，例如我分析过的农药啶虫眯（吡虫清）。 4 参数 记录的参数一般都内定的，不必修改，但GC和HPLC的参数是不完全一致的，例如C－R3A数据记录仪上的一般记录时间间隔GC为2ms，HPLC 为5ms，如果记录间隔时间缩短，一个峰将变为二个峰或更多。 |
回复此楼» 猜你喜欢
生物学303求调剂，一志愿华中农微生物，六级已过，有科研有文章，党员
已经有4人回复
-
318求调剂
已经有5人回复
-
0703调剂
已经有11人回复
-
化学357分，考研调剂
已经有10人回复
-
0854求调剂
已经有4人回复
-
272求调剂
已经有3人回复
-
调剂求助
已经有13人回复
-
332求调剂
已经有8人回复
-
341求调剂
已经有3人回复
-
一志愿电子科技大学085600材料与化工 329分求调剂
已经有10人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
2楼2008-01-24 16:06:27
3楼2008-01-24 16:56:27
4楼2008-01-26 21:03:37
5楼2008-01-27 17:09:17
7楼2008-01-31 09:33:40
8楼2008-01-31 11:58:23
9楼2008-02-13 14:24:57
11楼2008-02-14 17:47:01
12楼2008-02-14 20:19:06
13楼2008-02-15 11:24:34
14楼2008-02-17 11:02:04
15楼2008-02-19 17:39:34
16楼2008-03-13 20:40:59
简单回复
gtyhlag6楼
2008-01-30 13:23
回复
zyp21010楼
2008-02-13 21:33
回复
