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质粒在DH5内会发生自身重组吗？
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我现在构建的一个质粒里面有三对重复序列，长度分别约300bp, 500bp, 1kb，结构如图. 转化DH5a，鉴定连接产物时，用菌液pcr看两个接口是否正确，菌液摇几个小时还是清澈的，不过pcr能出来，而且有很多阳性克隆。摇过夜能看到细菌，但我怀疑长出来的是杂菌，因为质粒抽不出来。 现在这个载体都构建半年多了，一直是这个问题，菌液pcr鉴定正确，就是提不出质粒，请高手指点下是怎么回事。我是怀疑氨苄抗性基因的启动子被破坏了，或者是复制子重组掉了。但不知道重组是不是随机的，重组方式是怎么样的？  Snap1.jpg |
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