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lch22045

铜虫 (小有名气)

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专业: 基因表达调控与表观遗传学

[求助] 关于纳米金探针链接细胞膜表面整联蛋白亚基问题，新虫，金币不多，诚心求教。已有1人参与

以下是我读了一些文献，总结出来的方法，请各位帮忙指教一下其中的错误吧，谢谢了。
我做过一次，结果是纳米金探针和纳米金的紫外分光光度比较，探针发生红移了，也就是说我是探针成功了，但是最后却连不上细胞，请求帮助。
一。纳米金对兔IgG的吸附：
1.纳米金标记IgG的最佳pH值一般在9.0左右。将调好pH的胶体金,分装8管,每管1 mL。2.将IgG以0.005 mol/L pH=9.0硼酸盐缓冲液稀释为5~50mg/mL系列,分别取1 mL,加入到上述金胶溶液中(2~7号管),混匀。空白对照管(1号管)只加1 mL缓冲液,空白对照管(8号管)则加1 mL双蒸水。
3.5 min后,在上述各管中加入0.1 mL质量分数10%NaCl溶液,混匀后静置2h,观察结果。可以看出30~50Lg/mL的抗体溶液能稳定胶体金溶液,说明此质量浓度下抗体胶体金比例合适。
4.探针制备过程
A．取纳米金溶液1 mL，用K2C03调PH值为9。
B．加入一抗2.5ul(浓度10mg/ml)室温孵育l h。
C．加入20ul 1%BSA稳定和钝化纳米金。
D．12000rpm离心15min，去上清后，加入1ml 1%BSA溶解，4℃备用。
二。纳米金探针与膜蛋白链接
1. 将单核细胞取出到离心管，4° C ，30分钟，在PBS内。
2. 洗点PBS加入1%BSA，4°进行，反应30MIN.
3. 直接加入纳米金探针，反应1H，4°C进行。
4. 离心2500g，10min，4°C，洗3次。
三。关于检测
1.想知道如果我把纳米金探针链接到细胞膜蛋白上这个整体如果做电镜的话应该选择什么电镜？电镜具体的方法应该怎么做
2.以上我的相应的检测方法都能有哪些啊，请指点一点。

万分感谢，金币不多，真心求学。

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