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凝胶资料
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操作技术 1.装柱 葡聚糖凝胶和生物胶-P商品都是干粉，装柱前先量好柱的体积，再根据凝胶的吸水量算出干重，称重后用水溶胀（葡聚糖LH-20可用有机溶剂溶胀）。水量要超过吸水量。使之充分吸水溶胀。溶胀时间随交联度不同而异，温度高溶胀时间可短（参看表4-8）。溶胀平衡后，凝胶的颗粒应均匀，可用倾泻法细粒的颗粒。 柱的大小一般用短而较粗的柱。湿法装柱。待凝胶沉集后，再通过2~3倍柱体积的溶剂使柱床稳定，凝胶表面留一定量的溶剂。 2.加样、洗脱于收集 样品加水（或其他溶剂）配成适当的样品溶液（太浓的溶液黏度大、不易分离），加样方法与一般色谱柱相同。 上样后，选择洗脱液进行洗脱。常用洗脱液为水、酸、碱、盐和缓冲溶液。如用葡聚糖LH-20柱色谱，可用各种洗脱溶剂洗脱。一般把水作为洗脱溶剂洗脱时称凝胶过滤色谱，用有机溶剂为洗脱剂时称凝胶渗透色谱。 洗脱方式可上行业可下行，洗脱速度也要控制，速度大小受凝胶粒度及交联度影响。粒度细可稍快，交联度大可稍快。流出液可分步收集，再分析合并，得单一成分。 3. 凝胶的再生 一般说，凝胶柱可以反复使用，无需特殊再生处理，只是在色谱主用完后，用缓冲溶液稍加平衡即可进行下一次柱色谱。但是，凝胶柱经多次使用后，如果发现凝胶的色泽改变，流速减低，或者，有污染物沉积在柱床表面时，则需要再生。常用500C 左右的0.5mol/LNaOH和0.5mol/L NaCL混合液浸泡，再用水洗净。再生后用大量水洗涤，然后，逐步提高乙醇浓度，逐步皱缩（不要皱缩太快，以免引起结块）。然后，在60~800C干燥。 经常使用的凝胶以湿态保存，加入0.02%的叠氮钠（NaN3），可保存一年不至发霉。 |
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