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hongyan136

金虫 (正式写手)


[资源] 凝胶资料

操作技术
1.装柱
葡聚糖凝胶和生物胶-P商品都是干粉,装柱前先量好柱的体积,再根据凝胶的吸水量算出干重,称重后用水溶胀(葡聚糖LH-20可用有机溶剂溶胀)。水量要超过吸水量。使之充分吸水溶胀。溶胀时间随交联度不同而异,温度高溶胀时间可短(参看表4-8)。溶胀平衡后,凝胶的颗粒应均匀,可用倾泻法细粒的颗粒。
柱的大小一般用短而较粗的柱。湿法装柱。待凝胶沉集后,再通过2~3倍柱体积的溶剂使柱床稳定,凝胶表面留一定量的溶剂。
2.加样、洗脱于收集
     样品加水(或其他溶剂)配成适当的样品溶液(太浓的溶液黏度大、不易分离),加样方法与一般色谱柱相同。
上样后,选择洗脱液进行洗脱。常用洗脱液为水、酸、碱、盐和缓冲溶液。如用葡聚糖LH-20柱色谱,可用各种洗脱溶剂洗脱。一般把水作为洗脱溶剂洗脱时称凝胶过滤色谱,用有机溶剂为洗脱剂时称凝胶渗透色谱。
洗脱方式可上行业可下行,洗脱速度也要控制,速度大小受凝胶粒度及交联度影响。粒度细可稍快,交联度大可稍快。流出液可分步收集,再分析合并,得单一成分。

3. 凝胶的再生
一般说,凝胶柱可以反复使用,无需特殊再生处理,只是在色谱主用完后,用缓冲溶液稍加平衡即可进行下一次柱色谱。但是,凝胶柱经多次使用后,如果发现凝胶的色泽改变,流速减低,或者,有污染物沉积在柱床表面时,则需要再生。常用500C 左右的0.5mol/LNaOH和0.5mol/L NaCL混合液浸泡,再用水洗净。再生后用大量水洗涤,然后,逐步提高乙醇浓度,逐步皱缩(不要皱缩太快,以免引起结块)。然后,在60~800C干燥。
经常使用的凝胶以湿态保存,加入0.02%的叠氮钠(NaN3),可保存一年不至发霉。
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