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shihongxi001新虫 (初入文坛)
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Human Single Fold scFv Libraries I + J (Tomlinson I + J)抗体库
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有谁用过或了解 Human Single Fold scFv Libraries I + J (Tomlinson I + J) 抗体库？ 此抗体库使用前要求完成说明书上的预实验，并筛选的阳性率要达到50%以上。 随库附带两种噬菌体（保存于大肠杆菌TG1Tr菌种中），即阴性噬菌体13CG2（抗BSA，应该是用BSA筛库得到的噬菌体）和阳性噬菌体anti-ubi（抗牛泛素，应该是用牛泛素筛库得到的噬菌体）。 预实验内容为： 1、用牛泛素包被ELISA96孔板， 2、PBS洗后，加 阳性：阴性=1:100 的噬菌体， 3、PBS洗后，胰酶洗脱后梯度稀释并涂布到TYE培养基（Amp抗性）的平板上，37℃过夜培养。 4、挑单克隆分别到96孔细胞培养板上，接下来就是培养，最后离心，取上清（含噬菌体）用于ELISA（还是牛泛素包板）检测。 要求结果阳性率大于50%，即能从阳性：阴性=1:100的混合噬菌体中筛出50%以上的阳性噬菌体。 问题就出现在此步，我们得到的结果阳性率不到50%，考虑到牛泛素太贵，但BSA较便宜，所以将两种噬菌体反过来用，即13CG2（抗BSA）做阳性噬菌体，同时用BSA包板（代替牛泛素），试了几次阳性率仍然不高，最重要的是有时候ELISA完全不显色，即便用BSA包板，直接加事先制备好的阳性噬菌体进行ELISA，也不显色，不知哪步出了问题。 |
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2014-01-24 10:52:56, 80.5 K
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