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shihongxi001

新虫 (初入文坛)

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[求助] Human Single Fold scFv Libraries I + J (Tomlinson I + J)抗体库

有谁用过或了解 Human Single Fold scFv Libraries I + J (Tomlinson I + J) 抗体库？

此抗体库使用前要求完成说明书上的预实验，并筛选的阳性率要达到50%以上。

随库附带两种噬菌体（保存于大肠杆菌TG1Tr菌种中），即阴性噬菌体13CG2（抗BSA，应该是用BSA筛库得到的噬菌体）和阳性噬菌体anti-ubi（抗牛泛素，应该是用牛泛素筛库得到的噬菌体）。

预实验内容为：
1、用牛泛素包被ELISA96孔板，
2、PBS洗后，加阳性：阴性=1:100 的噬菌体，
3、PBS洗后，胰酶洗脱后梯度稀释并涂布到TYE培养基（Amp抗性）的平板上，37℃过夜培养。
4、挑单克隆分别到96孔细胞培养板上，接下来就是培养，最后离心，取上清（含噬菌体）用于ELISA（还是牛泛素包板）检测。

要求结果阳性率大于50%，即能从阳性：阴性=1:100的混合噬菌体中筛出50%以上的阳性噬菌体。

问题就出现在此步，我们得到的结果阳性率不到50%，考虑到牛泛素太贵，但BSA较便宜，所以将两种噬菌体反过来用，即13CG2（抗BSA）做阳性噬菌体，同时用BSA包板（代替牛泛素），试了几次阳性率仍然不高，最重要的是有时候ELISA完全不显色，即便用BSA包板，直接加事先制备好的阳性噬菌体进行ELISA，也不显色，不知哪步出了问题。

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附件 1 : Human_Single_Fold_scFv_Libraries_I_+_J_(Tomlinson_I_+_J).pdf

2014-01-24 10:52:56, 80.5 K

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1楼 2014-01-24 11:26:39

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