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ERIC20081938铁杆木虫 (小有名气)
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[求助]
木霉转化求高手指点 已有4人参与
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如题，最近一直在做木霉的PEG介导原生质体转化，用的筛选抗性是潮霉素，可是做了很多次，板上都很干净，一个都没长，下面将我的转化步骤大致说一下，求高手指点： 1 活化孢子，在摇瓶中30℃，170rpm培养约14h，让孢子萌发到一定长度。 2 制备原生质体，酶解，用的是lysingzyme （sigma）约2h，最终得到浓度约为1*108/mL的原生质体。 3 PEG介导转化，质粒浓度大于10ug，用的是25%的PEG6000。 4 上层琼脂涂布筛选平板。 可能这样说的也不是很清楚，跪求有经验的高手指点，感激不尽···· |
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