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LH-20的凝胶柱加压会破坏凝胶的结构吗？
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| 我使用的凝胶是LH-20的，曾经装在一个小柱子里因为当时没有经验没有考虑上样量的问题，所以分的效果很不好我就通过泵对柱子进行了加压让它快点跑完了。后来我把这些凝胶装回原柱后，这几次分离别的样品，上柱前点板可以看到2各点而且显色明显但是上柱后接的流分再点板就找不到我要的点了而且浓缩后也没有，不止一个样品是这样的，但是别的操作也没有问题。我以为是因为所要的东西是无色的所以还在柱上没冲下来可是又接了4个柱体积的洗脱剂点板还是没有我要的点？我现在不知道是什么原因所以都不敢在上凝胶柱了。可能是因为我对柱加压破坏了凝胶的结构吗？希望得到大家的指导，谢谢。洗脱剂是氯仿比甲醇1：1的 |
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2楼2008-01-10 20:45:02
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5楼2008-01-11 09:33:00
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jinuin(金币+1,VIP+0):谢谢。
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LH-20有死吸附，LH-20能承受的最大压力是流动相流过每小时700cm柱长 下面是LH-20说明书里的： Table 1. General physico-chemical properties and chromatographic performance characteristics of Sephadex LH-20 Matrix： Hydroxypropylated, cross-linked dextran Bead form： Spherical, porous Average particle size : Dry ：70 μm In methanol： 103 μm pH stability: Working 2–13 Cleaning 2–13 Chemical stability:Stable in most aqueous and organic eluent systems,Not stable below pH 2 nor to strong oxidizing agents Autoclavable : 20 minutes at 121°C Maximum linear flow rate: 700 cm/h Recommended linear flow rate :60 cm/h Operating temperature: 4°C to 40°C Sample loading volumes,Adsorption mode Depends on resolution required: Molecular sizing < 2% total medium volume Partition mode < 1% total medium volume Exclusion limit 4000–5000 (depends on solvent) |
9楼2008-01-13 09:03:44