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曾经走过

金虫 (初入文坛)

[求助] 用实验区分mRNA 和ncRNA

如题::在研究中发现一个新的哺乳动物细胞中的长RNA分子,设计实验研究它是编码蛋白质的mRNA、还是非编码RNA。
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致彩虹之巅

新虫 (初入文坛)

你好,现在你找到方法证明了吗?我们实验室要研究的一个基因,数据库已经预测它是非编码RNA但是如何用实验验证呢?急求
2楼2014-07-31 09:20:52
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曾经走过

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 致彩虹之巅 at 2014-07-31 09:20:52
你好,现在你找到方法证明了吗?我们实验室要研究的一个基因,数据库已经预测它是非编码RNA但是如何用实验验证呢?急求

验证是mRNA还是ncRNA:真核生物中的mRNA有明显的特征序列,即5’帽子(m7G)和3’Poly(A)尾巴。而哺乳动物mRNA的3’端有20-30个腺苷酸组成的Poly(A)尾,可以作为鉴别mRNA的标志。
     具体方法:首先合成15-20的聚dT和聚dA——>先进行聚dT的单引物PCR,经过5-10个循环——>加入聚dA继续进行PCR,经过25个循环——>结束后,进行电泳。如果得到了相应的扩增条带,说明此核苷酸序列是mRNA;反之,则为非编码RNA。
3楼2014-08-06 11:33:50
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