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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药代动力学 » 有做过药代排泄的虫子们看过来，有关提取回收率
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xiaoxi8601

银虫 (小有名气)

[求助] 有做过药代排泄的虫子们看过来，有关提取回收率 已有2人参与

楼主在做大鼠粪中药物的排泄率跟排泄量，用甲醇水将粪匀浆后离心取上清沉蛋白测定，想请教一下提取回收率怎么做呢？
我的想法是举个例子，取1g空白粪研磨粉末，加待测药物A标准溶液（100μg/ml）1ml混合，加甲醇水9ml后匀浆，离心取上清液100μl，加400μl甲醇沉蛋白，离心后进样测得峰面积W1。再直接进相同浓度的A标准溶液（2μg/ml）得峰面积W2，比值即为提取回收率。我想知道这样处理的粪药最后的进样浓度是2μg/ml么？如果是的话得出的提取回收率很低，才百分之20.。。。。求大神帮忙
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1楼 2014-01-03 11:27:48
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haoruijia8

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

你可以这么做：
1.取1g空白粪研磨粉末，加待测药物A标准溶液（100μg/ml）1ml混合，加甲醇水9ml后匀浆，离心取上清液100μl，加400μl甲醇沉蛋白，离心后进样测得峰面积W1。
2.取1g空白粪研磨粉末，加甲醇水9ml后匀浆，离心取上清液100μl，加400μl甲醇沉蛋白，离心后取上清液加入待测药物A使之浓度与1相同，进样测得峰面积W2，比值即为提取回收率
仅供参考！
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2楼2014-01-09 15:13:09
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小田123

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

药代方法学的建立是非常关键的，也是药代中最难的一部分，之前我做过一个一类新药申报项目，包括毒代和药代，不过用的是GC-MS，在做组织和排泄物的方法学的时候也发现了提取回收率达不到新药申报的要求，但是通过条件摸索，发现甲醇和乙腈按一定的比例混合后用来沉淀蛋白，发现回收率会有所上升，不同药物所需比例可能不同，楼主可以尝试下。
希望对楼主有所帮助！
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年轻要有追求
3楼2014-01-16 09:20:15
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xiaoxi8601

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 小田123 at 2014-01-16 09:20:15
药代方法学的建立是非常关键的，也是药代中最难的一部分，之前我做过一个一类新药申报项目，包括毒代和药代，不过用的是GC-MS，在做组织和排泄物的方法学的时候也发现了提取回收率达不到新药申报的要求，但是通过条 ...

谢谢亲，我想先确认一下我的处理方法以及所计算出的最终进样浓度是否正确，尤其是进样浓度这块，第一次接触排泄这方面，希望能多跟这位亲交流
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4楼2014-01-17 08:38:08
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xiaoxi8601

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 小田123 at 2014-01-16 09:20:15
药代方法学的建立是非常关键的，也是药代中最难的一部分，之前我做过一个一类新药申报项目，包括毒代和药代，不过用的是GC-MS，在做组织和排泄物的方法学的时候也发现了提取回收率达不到新药申报的要求，但是通过条 ...

谢谢亲，我想先确认一下我的处理方法以及所计算出的最终进样浓度是否正确，尤其是进样浓度这块，第一次接触排泄这方面，希望能多跟这位亲交流
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5楼2014-01-17 08:38:51
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小田123

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by xiaoxi8601 at 2014-01-17 08:38:51
谢谢亲，我想先确认一下我的处理方法以及所计算出的最终进样浓度是否正确，尤其是进样浓度这块，第一次接触排泄这方面，希望能多跟这位亲交流...

亲，首先你把1g空白粪便的体积忽略了，这个不恰当的，应该是加甲醇水定容到10ml，而不是直接加9ml甲醇水，这样才能保证将A标液稀释了10倍，如果按照你的方法，你稀释的应该不止10倍。那么W1肯定会小些，本来做排泄物的时候回收率很低的，你这样会使得回收率比真实值还要小。其他步骤和计算没问题。但是为了提高回收率，亲为什么用的是甲醇水来沉淀第一步蛋白呢？为什么不直接用甲醇，或者乙腈、氯仿等单一或者组合的提取剂呢？据我估计亲要测的这种药物应该是溶于纯有机溶剂的，而在水中的溶解度相对较小或者微溶或不溶，用纯的有机溶剂应该可以提高回收率！
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年轻要有追求
6楼2014-01-17 10:11:51
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小田123

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by 小田123 at 2014-01-17 10:11:51
亲，首先你把1g空白粪便的体积忽略了，这个不恰当的，应该是加甲醇水定容到10ml，而不是直接加9ml甲醇水，这样才能保证将A标液稀释了10倍，如果按照你的方法，你稀释的应该不止10倍。那么W1肯定会小些，本来做排泄 ...

还有就是想问下亲问的是什么仪器，如果是LC-MS或者GC-MS，那就要考虑基质效应的问题了，具体可以参考2楼的做法！
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年轻要有追求
7楼2014-01-17 10:33:50
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