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maoniuniu

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[求助] 请教酿酒酵母出孢子试验及酵母显微操作仪已有1人参与

各位前辈，我有些问题想请教。
我从酵母突变体库购买的二倍体酿酒酵母，所关心的基因位点是杂合的，是使用kanMX4编码片段进行的同源重组，带G418的抗性，菌株亲本是BY4743。
我想用带有我目的基因的质粒（URA筛选标记），先转进这个杂合体中，再通过诱导酵母产生四分体小孢子的方法，在G418 / -ura 的双筛选平板上将既是knockout又转入了质粒的小孢子筛选出来。
这是参考文献报道设计的实验，但我是做植物的，周围也没人做过这么偏酵母方面的实验，很多实验的protocol和实验细节都不清楚。
想请教几个问题：
1. 如何进行四分体诱导？我从网上，国内国外的实验室，搜到了很多protocol，但做法细节各异，想请问常用的有哪种，需要注意些什么，是否条件合适了就可以将所有细胞诱导成四分体呢
2.我是否需要将四分体进行显微解剖呢？那套设备实在太专了，我们这里没有，我目前觉得不需要，只要在双抗性上生长，不带抗性的小孢子会死掉。可我担心无法使所有的细胞都诱导成小孢子，另外会不会那些最早诱导出四分体的细胞分离出的小孢子又重新进行有性生殖而变成了杂合体的二倍体呢

非常抱歉，啰嗦了这么多，还希望表达清楚了。
还望不吝赐教！

另外我想请问，有前辈知道河北石家庄市哪个单位有酵母显微操作仪吗？

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1楼 2013-12-28 09:51:39

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maoniuniu

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引用回帖:

3楼: Originally posted by 酿酒酵母 at 2016-04-29 17:14:56
你好，请问你找到酵母显微操作仪了吗？目前我的试验也需要酵母显微操作仪，想请教一下。

我来挖坟了……抱歉没有当时看到。实验做完了，我一个做植物的，硬生生独立开展了一年酵母遗传操作。这项实验必须使用酵母显微操作仪，我后来是在网上偶然看到有一家北京的公司在推广英国品牌的酵母显微操作仪（小型的，基本就是在普通光学显微镜载物台上装了一套手动显微操作仪），可以网上预约使用，就填写了申请，他们公司还是很讲信用，两个人，一个工程师，一个销售，拖着一个很大的箱子就来了，我花了一周时间进行了显微操作，把四分体都挑了出来，并进行了单孢子分离

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