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求助：建成试剂盒F005-甘油含量测定,标曲制作
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各位亲人们，遇到标曲问题，如我列出的？ 2、标准品稀释： 用蒸馏水、生理盐水或与样品缓冲液一致的液体，将 4 mM 甘油标准品倍比稀释为 1000、 500、250、125、62.5、31.25、15.625、7.8125 μmol/L，通常 4～6 管即可，注意设置 0 浓 度对照反应管。 3、甘油测定: ①、参见下表加样。待测样品体积 10μl，多加可抑制反应。 ②、37oC 或 25oC 10 分钟。反应平衡后颜色在 60 分钟内稳定。 ③、先用蒸馏水空白管调零，然后测定各管 OD 值。 ④、绘制标准曲线并计算甘油浓度。Excel作图步骤：各标准管OD值为y轴，标准品浓度为x轴。 ① 鼠标左键圈住数据，点击做图向导，选择-散点图-，点击-完成-。② 鼠标右键点图上 的某一点，点击-添加趋势线-，点击-选项-，点击-显示公式-和-R2 值-。 ⑤、以每 mg 蛋白浓度或细胞数校正甘油三酯含量。 1000 500 250 125 62.5 35.7 21.4 10.7 550nm 0.234 0.119 0.056 0.027 0.017 0.007 0.017 0 得到的标曲太弯了。R平方值也不对。 1，我做了三个平行，平行间差不多？ 2，②、37oC 或 25oC 10 分钟。反应平衡后颜色在 60 分钟内稳定。 这一步我直接放在桌子上一小时，不知是不是这个原因？ 3，我用的是100ul体系，等于试剂盒体系减半，会不会是问题？如图2 4，我做标准品稀释时，是从前一管取一点，加到下一管，不是从标准品取一点加到下一管，会不会是问题？  QQ图片20131222202941.jpg  2.jpg |
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