western blot在加一抗之前最多封闭多久？ - 生物科学 - 蛋白电泳/WB

11楼2013-12-23 23:03:08

cicelyzh

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gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-24 00:24:06

引用回帖:

7楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-12-23 06:55:11
封闭只是block掉膜上无蛋白区域的非特异结合位点，时间长点没关系。但时间太长会造成block试剂（奶粉或者BSA）的变性。4°C过夜是可以的，室温下最好不要过夜。

室温下1个小时就足够，有人说15分钟是最短时间，我自己没有试过。时间稍微长一点没太多关系，三四个小时应该没有问题。比方说你在室温下放一杯牛奶，几个小时还不至于变质，如果过夜可能就不好说了。

12楼2013-12-23 23:19:55

cc300j

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来来来，老江湖今天闲来无事，给你解答一下，嘻嘻
牛奶封闭的话，放在4度，我放过一周，拿出来用TBST洗一个小时，再孵一抗。还是没什么问题。
当然，仅限个人一个小小的经历。牛奶变质，一抗效价都是干扰因素。仅供参考。哈哈哈

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13楼2013-12-24 02:21:58

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我最近做过，加一抗可以过夜没问题

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]

14楼2013-12-24 07:12:01

1217253647

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一抗我一般在室温下摇床过夜，效果不错。

15楼2014-01-19 22:53:04

luanfeiren

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2个小时就可以的在一抗 4度过夜

16楼2014-03-17 13:52:09

jiaolong11a

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一般室温一小时，时间长的话那就4度过夜

多情总被无情扰。。。愁

17楼2014-03-17 15:30:43

weskerZXC

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我每次都是转完膜就封闭，最长封闭过5小时，没有影响

18楼2014-03-18 10:22:19