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落满夏天

银虫 (正式写手)

[交流] PH8.0TRIS-HCL缓冲液,样品等电点6.0左右,哪些原因挂不上DEAE柱?

我的样品缓冲液是0.1M的8.0的TRIS-HCL,洗脱液是5.0的醋酸醋酸钠,等电点在6.0左右,挂不上DEAE,不知道有哪些原因,求高手解答,一般DEAE的载量是多少?后期发现有流穿现象,200ML填料上样约4克的蛋白吧.不知道是何原因.
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1楼 2013-12-20 12:27:52
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jwt345532945

新虫 (小有名气)
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引用回帖:
5楼: Originally posted by 落满夏天 at 2013-12-28 22:23:26
GE的填料.平衡充分,稀释20倍后浓度为0.18左右,电导1.4.一开始感觉能挂上一些,最后感觉全部流穿了,上样一夜.

缓冲液浓度过高，采用更高的pH，更低浓度的缓冲液
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6楼2014-01-03 20:21:32
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cpu_minigene

铁虫 (小有名气)
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落满夏天(zhychen2008代发): 金币+1, 多谢回帖交流 2013-12-31 23:05:46
样品有没有测电导，可能电导太高
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2楼2013-12-21 14:16:38
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jwt345532945

新虫 (小有名气)
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落满夏天(zhychen2008代发): 金币+2, 多谢回帖交流 2013-12-31 23:05:34
你是完全不挂柱，还是有挂住，但不完全啊
上样前，柱子有没有平衡好？
尝试下50mM pH 9.0的缓冲液，降低样品浓度，上样流速试试
DEAE柱，不同厂家的，不同的样品，载量都有差别，一般200ml填料，结合4g，还可以
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3楼2013-12-25 15:00:14
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落满夏天

银虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cpu_minigene at 2013-12-21 14:16:38
样品有没有测电导，可能电导太高

电导高,后来稀释了31倍,最终电导在1.4左右!
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4楼2013-12-28 22:21:53
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