24小时热门版块排行榜    

查看: 13084  |  回复: 13

不叶珏

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
zb0806030: 金币+4, ★★★★★最佳答案 2013-12-24 22:11:49
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-01-27 20:53:31
a. 把待退火的DNA oligo用经灭菌的去离子水配制成100μM。
        b. 如下设置退火反应体系:
        Nuclease-Free Water        70μl
        Oligo DNA annealing buffer(10×)        10μl
        DNA oligo A (100μM)        10μl
        DNA oligo B (100μM)        10μl
        Total        100μl
        按照上述顺序依次加入各种试剂,混匀。
        Oligo DNA annealing buffer (10×):100mM Tris pH8.0, 500mM NaCl, 10mM EDTA

Place tube in a standard heatblock at 90–95 °C for 3–5 minutes. Remove the heat block from the apparatus and allow to cool to room temperature (or at least below 30 °C) on the workbench. Slow cooling to room temperature should take 45–60 minute
借你一生好不好
11楼2013-12-22 13:01:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mosquito419

新虫 (初入文坛)

今天看到这个帖子。我的实验也是合成两个引物(50多bp),退火后形成双链(跑胶看过,大小都对),然后插入切好的质粒(质粒双酶切后,跑胶回收)。但是试了好几回,都连不起来,转化完全没有克隆长。不知是什么问题呢?
12楼2015-07-26 09:13:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mosquito419

新虫 (初入文坛)

我的两条引物合成以后,没有进行磷酸化,是不是磷酸化必须的呢?我用的是takara的T4连接酶,室温1h, 2h或者16度过夜都连接不上
13楼2015-07-26 09:16:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shenyouqishi

铁虫 (初入文坛)

我是第一次尝试退火连接,尝试了几种退火方式和反应体系都不行,请问,哪位大神能给一份成功率较高的反应体系和退火方式?我的引物带有酶切后的酶切位点。谢谢
14楼2016-01-09 14:41:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 zb0806030 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 什么时候开奖? +8 CrisMessi 2026-08-18 9/450 2026-08-23 10:49 by 旋风马1987
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-21 9/450 2026-08-23 10:44 by IXZuIJ2Q7OVy
[基金申请] 让我中一个面上吧! +12 大萍1987 2026-08-20 14/700 2026-08-23 10:30 by wrm
[论文投稿] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 4/200 2026-08-23 04:04 by OEbVnUOu01ol
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 7/350 2026-08-23 03:55 by OEbVnUOu01ol
[论文投稿] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 5/250 2026-08-23 03:52 by OEbVnUOu01ol
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 7/350 2026-08-23 03:43 by OEbVnUOu01ol
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +7 且听虎啸 2026-08-17 8/400 2026-08-22 21:55 by 医学老男孩
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +24 yaoyewhu2008 2026-08-20 26/1300 2026-08-22 17:43 by kammury
[基金申请] 人气不行了 +8 fansofjerry 2026-08-21 8/400 2026-08-22 16:30 by zyqchem
[基金申请] 今天基金会出结果吗?20260819 +16 kkkl_v 2026-08-19 17/850 2026-08-22 16:12 by 阿布Abu
[基金申请] 今日不放榜?网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +16 医学老男孩 2026-08-20 20/1000 2026-08-21 21:13 by Ldrop2023
[基金申请] 看来今天不会放榜了? +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +7 angus9576 2026-08-17 12/600 2026-08-21 13:38 by weiyin
[基金申请] 我面上完蛋了 +7 且听虎啸 2026-08-20 8/400 2026-08-21 12:31 by 酷酷墨镜
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
[基金申请] 估计是周四 +3 archvillain 2026-08-18 3/150 2026-08-21 01:48 by jnhyjjm
[基金申请] 重要消息,中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
信息提示
请填处理意见