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张鑫1982

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
费姚永芬: 金币+2, 谢谢指导,欢迎常来分析版帮助虫友解答 2013-12-16 21:25:47
tagzhh: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-12-16 21:39:18
小朋友们问问题还是没有图,描述的也不甚了了,我着急得都要哭了。

牡蛎匀浆后用C18做,显然还是分析一般样品,简单跟你做个讨论。生物样品由于蛋白质含量大,如果没处理好,堵柱子是正常的,具体能不能恢复,不一定。给个教训你也是让你知道分析实验不仅是脏活累活,还是个技术活。

一般的,生物样品会以高浓度的有机溶剂或无机酸将蛋白质变性处理,力求将与蛋白质结合的待测物质分离。当然除了匀浆,还可能会有超速离心、氮吹、冻干、固相萃取等手段,前期处理好了,检测只是个结果而已。

你这情况,我没处理过。建议下次使用配预柱。

[ 发自小木虫客户端 ]
如果今天和昨天一样,那么明天又有什么意义?
21楼2013-12-16 20:34:11
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gsli1987

木虫 (正式写手)

引用回帖:
9楼: Originally posted by tagzhh at 2013-12-16 11:09:32
我样品中加了50%水50%甲醇提取的,用的水膜过的。这是不是错了?
...

这个应该用有机膜过滤,有可能是这个因素影响的,水洗膜遇有机相容易漏,你过膜的时候能不能感受到一定阻力呢?
每个人都生来孤独
22楼2013-12-16 22:21:16
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killeyey

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
11楼: Originally posted by tagzhh at 2013-12-16 15:18:07
我样品里含甲醇,结果用了水膜过滤的,会不会柱子就这样完蛋了啊?...

不会的,现在柱子的填料都是比较稳定的。
23楼2013-12-17 12:11:06
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yunjiansd

金虫 (正式写手)

这多半是柱子堵了,你加预柱了吗?基线不平大概就是因为这个关系,先用95%水的甲醇冲20分钟,再用10%水的甲醇低流速冲吧,估计冲个一晚上(不要用纯甲醇,否则会有水性的东西析出来的,保存柱子现在也一般不提倡用纯甲醇保存)
24楼2013-12-17 12:38:17
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汶水长流

金虫 (小有名气)

气泡是可能的一个情况!
james
25楼2013-12-17 12:47:08
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rosegarden

金虫 (正式写手)

我也觉得可能是进气泡了
坚持
26楼2013-12-17 15:20:13
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1949stone

荣誉版主 (知名作家)

海纳百川

考虑蛋白析出
海纳百川止于至善
27楼2013-12-17 15:45:44
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tagzhh

木虫 (著名写手)

引用回帖:
27楼: Originally posted by 1949stone at 2013-12-17 15:45:44
考虑蛋白析出

谢谢!我想大概也是如此。
提取剂用的水、甲醇,但是流动相用的是乙腈、0.1%TFA,应该是TFA沉淀了牡蛎提取液中的蛋白质。老师让我反接柱子,50甲醇50水,0.2流速不接DAD来冲。
28楼2013-12-17 15:49:21
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tagzhh

木虫 (著名写手)

引用回帖:
21楼: Originally posted by 张鑫1982 at 2013-12-16 20:34:11
小朋友们问问题还是没有图,描述的也不甚了了,我着急得都要哭了。

牡蛎匀浆后用C18做,显然还是分析一般样品,简单跟你做个讨论。生物样品由于蛋白质含量大,如果没处理好,堵柱子是正常的,具体能不能恢复,不 ...

谢谢!原因确实应该是没处理蛋白质。
我提取剂用的水、甲醇,但是流动相用的是乙腈、0.1%TFA,应该是TFA沉淀了牡蛎提取液中的蛋白质。老师让我反接柱子,50甲醇50水,0.2流速不接DAD来冲。不知道能不能好
29楼2013-12-17 15:50:43
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1949stone

荣誉版主 (知名作家)

海纳百川

引用回帖:
28楼: Originally posted by tagzhh at 2013-12-17 15:49:21
谢谢!我想大概也是如此。
提取剂用的水、甲醇,但是流动相用的是乙腈、0.1%TFA,应该是TFA沉淀了牡蛎提取液中的蛋白质。老师让我反接柱子,50甲醇50水,0.2流速不接DAD来冲。...

柱前加一段过滤试试 这样起码不会废柱子
海纳百川止于至善
30楼2013-12-17 15:52:18
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