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怎样进行葡聚糖凝胶的预处理???
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急切~ 请大家帮帮忙,不想浪费老板的钱,葡聚糖凝胶实在太贵了  |
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liu200479
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- 专业: 天然药物化学
4楼2008-01-08 16:09:55
liu200479
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karl2100(金币+1,VIP+0):谢谢应助！
louyiceng(金币+0,VIP+0):谢谢
karl2100(金币+1,VIP+0):谢谢应助！
louyiceng(金币+0,VIP+0):谢谢
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凝胶预处理： 1sephadexG凝胶有个换算公式，根基公司计算出膨胀后的凝胶体积，必须向售货方要说明书，以确定装柱流速和分离最佳流速防止流速过高压坏凝胶。而且要注意软胶和硬胶装柱方法有别sephadexG,DEAE-sephadex-A系列为软胶sephacrylS,Superdex为硬胶，填充方法不同。 2 称取凝胶干粉12克，放入250毫升锥形瓶中，加入过量的水，室温浸泡24小时，或沸水浴（100）浸泡3小时。 3. 溶胀平衡后的凝胶用倾法除去细颗粒。如果没有细颗粒不用清。其方法是用搅棒将凝胶搅匀（注意不要过分搅拌，以防止颗粒破碎），放置数分钟机，将未沉淀的细颗粒随上层水倒掉。浮选3-5次，直至上层没有细颗粒为止。 4 将浸泡后凝胶抽干，用300毫升洗脱液平衡1小时，减压抽气10分钟以除去气泡。 5. 将层析柱垂直装好，在柱内先注入1/4-1/5的水，底板以下全部充满水，不留气泡，关闭柱出口，出口处接上一根直径2 mm细塑管越短越好防止分开的样品扩散导致分离失败。 6取柱直径大于1cm色谱柱（直径必须大于1cm），务必使柱垂直地面，接上装柱器，摇动装凝胶的瓶（切勿摇太快，以免空气再逸入），使形成均一的薄胶浆，将溶胀好的sephadexG用漏斗一次性倒入色谱柱中。 7 将色谱柱下端出口街上横流泵，打开下端出口，用横流泵调节流速为XXml/min，（此处必须根据说明书来调流速防止压坏凝胶，最佳流速分的样品多）并保持此流速xh，关闭下端出口，将色谱柱接上端加上柱头，用横流泵排除管路中的气泡，并与上端的柱头相接，打开下端出口。 8 柱装好后用蓝色葡聚糖2000检查层析，色带狭窄并且均一。 |
2楼2008-01-02 14:29:48
3楼2008-01-05 15:05:12
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