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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 转基因 » 转基因植株PCR检测
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tanwuping

新虫 (初入文坛)

[求助] 转基因植株PCR检测

我扩的30个循环，检测出来的，有的样品条带很弱，除模板不一样，其它所有条件一致。请问条带很弱是什么原因，这种弱的条带能算阳性植株吗？
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1楼 2013-12-03 20:42:20
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cxwu10016869

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
tanwuping: 金币+2, ★有帮助 2013-12-11 14:19:06
2楼3楼说的都有道理。
PCR条带不亮可能与模板量低有关系，或者PCR反应体系及条件有关，建议检测模板完整性及含量，用阳性质粒及非转基因植株分别做阳性和阴性对照，比较一下看看。
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4楼2013-12-04 20:07:02
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ck8148

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
tanwuping: 金币+2, ★有帮助 2013-12-11 14:18:47
用southern检测就不用那么纠结了
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2楼2013-12-04 09:03:47
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zhoulubin

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
tanwuping: 金币+2, ★有帮助 2013-12-11 14:18:57
对转基因植株的检测我一般是用一条载体的引物，一条目的片段的引物
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每个年龄都有其最应该做的事，但只有过了那个年龄自己才知道
3楼2013-12-04 12:07:58
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tanwuping

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by cxwu10016869 at 2013-12-04 20:07:02
2楼3楼说的都有道理。
PCR条带不亮可能与模板量低有关系，或者PCR反应体系及条件有关，建议检测模板完整性及含量，用阳性质粒及非转基因植株分别做阳性和阴性对照，比较一下看看。

如何检测模板的完整性？我有做过阳性和阴性对照，也是一样。现在有出了个难题，为了进一步验证，我把这些能出条带的植株，再次提取DNA做PCR检测，没有一个有目的条带的。（所有条件相同，阳性对照有条带，而且用之前能出条带的基因组DNA也做对照，有条带）我该怎么往下做？？？
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5楼2013-12-09 09:10:40
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